腺相關病毒介導的VEGF-,165-基因轉移改善小型豬慢性心肌缺血的研究.pdf

1、血管內皮生長因子（VEGF）基因治療是促血管生成治療的研究熱點。腺相關病毒（AAV）是一種新型載體，具有眾多優(yōu)點。研究表明，在小型動物急性下肢動脈或冠狀動脈閉塞模型上，AAV介導的VEGF基因轉移能夠促進缺血組織側支血管形成。本實驗目的是在小型豬慢性心肌缺血模型上，觀察重組腺相關病毒2型載體(rAAV2)介導的VEGF165基因轉移促進冠狀動脈側支形成和改善缺血心肌血流及心功能的有效性。 第一部分：結扎左冠狀動脈前降支建立小型豬

2、急性冠狀動脈閉塞模型，經微開胸心肌內注射rAAV2-VEGF165，并按劑量分成四個亞組: 1′1011 virus.genome (v.g)、 5′1011v.g、 1′1012v.g、 5′1012v.g。應用逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）、免疫組織化學染色、血管計數和冠狀動脈造影術檢測VEGF基因在心肌中的表達、評價其生物學作用并找出最合適劑量。結果各亞組均獲得VEGF的有效表達且表達量隨劑量而增加；1′1012v.g組及5′

3、1012v.g組心肌毛細血管密度和冠狀動脈側支循環(huán)分級明顯增加且兩組之間無明顯差異，故以1′1012v.g為最合適劑量。 第二部分：以Ameroid Constrictor建立小型豬慢性心肌缺血模型，經心電圖、冠狀動脈造影和核磁共振（MRI）確認左冠狀動脈回旋支閉塞或相應心肌缺血后，經微開胸導入rAAV2-VEGF1651′1012v.g。采用RT-PCR、Western Blot及免疫組織化學染色檢測VEGF的表達，通過心肌血

4、管計數、冠狀動脈造影和MRI觀察其生物學效應。結果放置Ameroid Constrictor后5周，所有動物均成功建立慢性心肌缺血模型。導入基因后3個月外源VEGF 基因仍持續(xù)表達，6個月時表達下降。治療后心肌毛細血管和小動脈密度均增加，心肌血流灌注明顯改善，左心室收縮功能無顯著變化。 結論 本研究初步證實了rAAV2-VEGF165能夠促進小型豬慢性缺血心肌血管生成并改善心肌血流灌注，為rAAV2-VEGF165在冠心