羧甲基殼聚糖納米微粒的制備及其對瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖的影響.pdf

1、瘢痕疙瘩是皮膚損傷后引發(fā)的膠原異常積聚所致的過度瘢痕化，其產(chǎn)生原因主要是由于瘢痕疙瘩成纖維細胞合成與分泌膠原能力的增強或此種細胞的大量增殖。羧甲基殼聚糖(羧甲基殼聚糖)作為一種水溶性的殼聚糖(CS)衍生物，具有良好的生物相容性和組織親和性，它能夠促進皮膚成纖維細胞生長，在皮膚軟組織修復方面有著較好的應用。本文構建了羧甲基殼聚糖納米微粒體系，利用黃種人瘢痕疙瘩組織體外培養(yǎng)得到瘢痕疙瘩成纖維細胞，研究了羧甲基殼聚糖納米微粒體系對于瘢痕疙瘩成

2、纖維細胞增殖的影響，并初步討論了其作用機理。
　　 1、羧甲基殼聚糖納米微粒的制備和性質檢測
　　 通過堿化溶脹殼聚糖和氯乙酸的取代反應，制備了兩種不同分子量(196kDa和6.3kDa)的羧甲基殼聚糖樣品，分子量為196kDa的羧甲基殼聚糖經(jīng)雙氧水降解6h、9h后，得到了分子量為16kDa和7.5kDa的羧甲基殼聚糖，所制備的四種羧甲基殼聚糖樣品具有良好的水溶性，并且脫乙酰度(DD)和羧甲基度(DS)基本相同(DD：9

3、2％±2％；DS：78％±3％)。通過離子交聯(lián)法制備了四種分子量不同的羧甲基殼聚糖納米微粒。通過紅外光譜檢測證明了羧甲基殼聚糖以及羧甲基殼聚糖納米微粒被成功合成。隨后通過透射電鏡以及動態(tài)光散射粒度分析儀檢測了羧甲基殼聚糖納米微粒的表觀形態(tài)和粒度分布。結果表明，羧甲基殼聚糖納米微粒呈規(guī)則球形，無粘連，且粒徑分布在180nm-250nm。
　　 2、瘢痕疙瘩成纖維細胞的體外培養(yǎng)
　　 利用黃種人瘢痕疙瘩組織體外培養(yǎng)得到瘢痕疙

4、瘩成纖維細胞。原代培養(yǎng)10-15天后，在瘢痕疙瘩組織塊附近，成纖維細胞從組織塊周圍遷移出來，并伴有少量的上皮細胞生長，經(jīng)3-5次傳代培養(yǎng)后，上皮細胞消失，瘢痕疙瘩成纖維細胞大量生長。通過對瘢痕疙瘩成纖維細胞生長曲線的繪制，發(fā)現(xiàn)瘢痕疙瘩成纖維細胞在傳代后的第二天達到對數(shù)生長期。
　　 3、羧甲基殼聚糖納米微粒對于瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖的影響
　　 采用MTT法，研究了不同濃度、不同作用時間以及不同分子量的羧甲基殼聚糖納米微

5、粒對于瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖的影響。結果表明：不同分子量的羧甲基殼聚糖納米微粒對于瘢痕疙瘩成纖維細胞的增殖均有抑制作用，羧甲基殼聚糖納米微粒的作用濃度在2μ g/mL-200μ g/mL時，抑制率隨著羧甲基殼聚糖納米微粒作用濃度的增加而升高，當羧甲基殼聚糖納米微粒濃度為100μ g/mL時，達到最小抑制濃度，對于四種分子量不同的羧甲基殼聚糖納米微粒，瘢痕疙瘩成纖維細胞的抑制率隨著羧甲基殼聚糖納米微粒分子量的降低而升高，分子量為6.3kD

6、a的羧甲基殼聚糖納米微粒具有最高抑制率，達到48.79％。與羧甲基殼聚糖水溶液相比，羧甲基殼聚糖納米微粒對于瘢痕疙瘩成纖維細胞的抑制率隨著時間(1天-6天)的變化，表現(xiàn)出前低后高的趨勢，當作用時間達到6天時，羧甲基殼聚糖納米微粒與羧甲基殼聚糖水溶液對于瘢痕疙瘩成纖維細胞的抑制率基本相同(羧甲基殼聚糖納米微粒：48.79％；羧甲基殼聚糖水溶液：49.69％；p=0.844)。通過比較殼聚糖、羧甲基殼聚糖水溶液和羧甲基殼聚糖納米微粒對于瘢痕