母鼠孕期補(bǔ)充維生素D預(yù)防LPS誘發(fā)的神經(jīng)管畸形.pdf

1、目的：前期研究證實，母體孕中期暴露細(xì)菌脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）可導(dǎo)致子代神經(jīng)管畸形（Neural Tube Defects,NTDs）的發(fā)生。本研究探討了母鼠孕期補(bǔ)充維生素D3（Vitamin D3,VitD3）對LPS誘發(fā)胎鼠神經(jīng)管畸形的影響。
　　方法：成年的清潔級ICR小鼠（8w），自由飲食，在室溫維持于20℃~25℃，晝夜節(jié)律均衡，且保持相對濕度45％～55%的環(huán)境中適應(yīng)性喂養(yǎng)2周后，按雌雄比

2、4:2于頭一天晚上9:30合籠，次日清晨7:30檢查雌鼠陰栓，以查到陰栓者視為交配成功，并定為妊娠第0天（GD0）。為探討VitD3對LPS誘發(fā)胎鼠神經(jīng)管畸形的影響，所有孕鼠均于GD0隨機(jī)分為4組：單純對照組（Control組），單純VitD3補(bǔ)充組（VitD3組），LPS暴露組（LPS組）和LPS+VitD3組，每組15只。LPS組和LPS+VitD3組孕鼠均于GD8至GD12每天經(jīng)腹腔注射給予25μg/kg的LPS，VitD3組和L

3、PS+VitD3組孕鼠均于GD6至GD12每天經(jīng)灌胃方式給予25μg/kg的VitD3。Control組給予等容量的生理鹽水。GD18剖殺所有孕鼠，觀察胎鼠外觀是否存在畸形，統(tǒng)計活胎、吸收胎和死胎數(shù)，稱量活胎鼠體重和胎盤重，測量活胎鼠身長，評價活胎鼠骨骼發(fā)育情況；為探討VitD3對葉酸由母體轉(zhuǎn)入胎鼠的影響，所有孕鼠均于GD0隨機(jī)分為4組：Control組，VitD3組，LPS組和LPS+VitD3組，每組6只。LPS組和LPS+VitD

4、3組孕鼠均于GD8至GD12每天經(jīng)腹腔注射給予25μg/kg的LPS，VitD3組和LPS+VitD3組孕鼠均于GD6至GD12每天灌胃給予25μg/kg的VitD3。Control組給予等容量的生理鹽水。末次LPS處理后12h剖殺所有孕鼠，取母鼠血清和胚胎，并采用電化學(xué)免疫發(fā)光法檢測葉酸水平；為探討VitD3對胎盤葉酸轉(zhuǎn)運體基因和炎性細(xì)胞因子基因表達(dá)的影響，所有孕鼠均于GD0隨機(jī)分為4組：Control組，VitD3組，LPS組和LP

5、S+VitD3組，每組12只。LPS組和LPS+VitD3組孕鼠均于GD10經(jīng)腹腔注射給予25μg/kg的LPS，VitD3組和LPS+VitD3組孕鼠于GD8至GD10每天灌胃給予25μg/kg的VitD3。Control組給予等容量的生理鹽水。LPS處理后2h剖殺半數(shù)孕鼠，取母體血清、羊水和胎盤，ELISA法檢測血清和羊水TNF-α和IL-6蛋白水平，real-time RT-PCR法檢測胎盤炎性細(xì)胞因子和趨化因子基因表達(dá)水平。LP

6、S處理后12h剖殺余下孕鼠，real-time RT-PCR法檢測胎盤葉酸代謝酶和轉(zhuǎn)運體基因表達(dá)水平。
　　結(jié)果：GD8－GD12連續(xù)給予5天的LPS后，20.3％胎鼠發(fā)生神經(jīng)管畸形，且發(fā)生神經(jīng)管畸形胎的孕鼠高達(dá)62.5%（10/16）。與對照組相比，LPS組胎鼠均重和胎盤均重均顯著降低。LPS處理可引起胎鼠胸骨畸形、肋骨畸形和枕骨骨化不全。這些研究結(jié)果表明：母鼠致畸敏感期暴露低劑量LPS可誘發(fā)胎鼠神經(jīng)管畸形，并導(dǎo)致胎鼠宮內(nèi)生長受

7、限和骨骼發(fā)育遲緩。進(jìn)一步實驗發(fā)現(xiàn)：LPS處理后，胎盤葉酸轉(zhuǎn)運泵－質(zhì)子偶聯(lián)葉酸轉(zhuǎn)運泵（pcft）和還原性葉酸載體1（rfc-1）基因表達(dá)顯著下調(diào)，且發(fā)現(xiàn)LPS處理組胎鼠葉酸水平顯著低于對照組；LPS處理后，胎盤tnf-α、il-1β、il-6等炎性細(xì)胞因子和mcp-1、kc、mip-2等趨化因子基因表達(dá)水平顯著高于對照組，母鼠血清和羊水TNF-α和IL-6蛋白水平亦明顯高于對照組。此外，母鼠孕期補(bǔ)充VitD3顯著減輕LPS引起的母體和胎盤