喹啉酸在炎癥進程中的意義探討.pdf

1、第一部分外源性喹啉酸對急性和亞急性炎癥動物模型的作用研究。 目的：研究外源性給予喹啉酸對動物急性和亞急性炎癥模型的影響。 方法：采用醋酸一伊文思蘭模型、二甲苯模型、CMC囊法模型、棉球肉芽腫模型和碳粒廓清法模型，研究喹啉酸劑量O.35mg/10g、0.07mg/l0g灌服給予對實驗性急性和亞急性炎癥的影響。 結(jié)果：外源性給予的喹啉酸呈劑量依賴性抑制炎癥過程中出現(xiàn)的白細胞聚集、白細胞總數(shù)和中性粒細胞升高、巨噬細胞吞

2、噬功能增強及成纖維細胞增生，但對炎癥早期的血管通透性增加、滲出增多和局部水腫的抑制作用無明顯劑量依賴性。 結(jié)論：外源性喹啉酸對炎癥的發(fā)展過程有一定抑制作用。其中阻遏炎癥中后期發(fā)展的作用明顯，但內(nèi)源性產(chǎn)生的喹啉酸是否作為抗炎物質(zhì)起作用尚待證實。 第二部分血清喹啉酸水平的氣質(zhì)聯(lián)用檢測方法的建立 目的：建立一個簡便、準(zhǔn)確、快速檢測微量喹啉酸的方法，以監(jiān)測在大鼠膿毒癥模型中不同時間血清喹啉酸水平的變化情況。 方法

3、：選擇不同的吸附劑和洗脫方式進行大鼠血清樣品分離純化試驗，對在酯化反應(yīng)中影響較大的反應(yīng)溫度、時間、反應(yīng)物濃度等條件進行比較研究，確定了喹啉酸酯化反應(yīng)的最佳反應(yīng)溫度和反應(yīng)時間，分析各組分間相互作用及其用量對衍生化效率的影響。 考察不同色譜、質(zhì)譜條件以及進樣量對血清中喹啉酸含量測定的影響?？疾旆椒ǖ膶傩裕x擇定量離子，建立工作曲線。測定方法的精密度、定量限、回收率、線性范圍。測定血清衍生化前不同喹啉酸濃度及凍存時間對檢測結(jié)果的影響

4、以及衍生后喹啉酸酯的穩(wěn)定性。 結(jié)果：篩選出用Strata-X小柱進行血清樣品前處理的優(yōu)化程序，確定了衍生化試劑的用量和酯化反應(yīng)條件，優(yōu)化了氣質(zhì)聯(lián)用測定參數(shù)設(shè)置。建立了經(jīng)SPE柱預(yù)處理后，用三氟醋酸酐為催化劑、六氟異丙醇為酯化劑進行衍生化，氣質(zhì)聯(lián)用法測定血清喹啉酸含量的方法。 結(jié)論：所建立的喹啉酸測定方法酯化反應(yīng)完全，產(chǎn)物單一，能得到理想的分離、檢測和定量分析效果。方法的專一性良好，定量限為25nmol／L，喹啉酸濃度在0

5、．05-20p．mol／L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。以Scan方式定性，SIM定量檢測，結(jié)果準(zhǔn)確、干擾少。方法簡便、快速，每次測定時間僅為15min，適用于少量多次采集血樣后進行喹啉酸水平分析。同時，研究也表明喹啉酸的六氟異丙醇衍生物較為穩(wěn)定，但血清不宜長時間凍存，宜盡快純化、衍生、測定。 第三部分膿毒癥大鼠臨床癥狀的轉(zhuǎn)歸與血清喹啉酸和細胞因子表達的關(guān)系 目的：考察膿毒癥大鼠臨床癥狀的轉(zhuǎn)歸與血清喹啉酸水平、細胞因子表達的關(guān)系。

6、 方法：通過結(jié)扎盲腸末端并造成穿孔，復(fù)制與臨床類似的大鼠膿毒癥模型，在術(shù)前、術(shù)后4h、12h、36h、72h和144h從內(nèi)眥靜脈采取血樣。觀察動物的一般情況，計算存活率，進行白細胞計數(shù)和分類，以酶聯(lián)免疫法測定血清TNF-α、IL-6含量，氣質(zhì)聯(lián)用法測定喹啉酸水平。 結(jié)果：膿毒癥大鼠在術(shù)后12-24h、48-72h出現(xiàn)兩次死亡高峰。白細胞總數(shù)在12h達峰，中性粒細胞比例在36h達峰。術(shù)后TNF-0t水平在l2h達峰，并保持

7、到72h，到144h血中濃度仍可達峰濃度的80％；IL-6水平在建模后4h迅速增加，達到假手術(shù)組的3倍，12h達到假手術(shù)組的4倍，36h達峰，72h降至峰濃度的40％，144h血中仍可檢出。血清喹啉酸濃度自12h起顯著增高，72h達峰，到144h仍可達峰濃度的65％。 結(jié)論：TNF-α[與膿毒癥大鼠死亡第一和第二波密切相關(guān)，其水平越高，機體損傷越嚴(yán)重，預(yù)后越差。IL-6水平與膿毒癥大鼠的第一波死亡密切相關(guān)，但與第二波死亡的關(guān)系不

8、如TNF-fz密切。喹啉酸水平變化提示該物質(zhì)不是在創(chuàng)傷后立即被大量釋放，可能是在炎癥反應(yīng)中，致炎因子大量表達后出現(xiàn)的內(nèi)源性物質(zhì)；其作用很可能與炎癥調(diào)控或?qū)惯^度炎癥有關(guān)。 第四部分不同處理對膿毒癥大鼠臨床癥狀轉(zhuǎn)歸的影響與血清喹啉酸和細胞因子關(guān)系的研究 目的： 觀察對膿毒癥大鼠進行不同處理后，臨床癥狀轉(zhuǎn)歸的變化和血清喹啉酸、細胞因子水平的改變以及這三者之間的關(guān)系。 方法：通過結(jié)扎盲腸末端并造成穿孔，復(fù)制與臨床類似的

9、大鼠膿毒癥模型后，隨機將大鼠分為假手術(shù)組、模型組(給予溶劑處理)、抗菌藥組(給予慶大霉素2．25mg／kgim、阿莫西林360mg／kgig和甲硝唑108mg／kgig聯(lián)合治療)和地塞米松組(給予地塞米松0．675mg／kgsc治療)。在術(shù)前、術(shù)后4h、12h、36h、72h和144h從內(nèi)眥靜脈采取血樣。觀察動物的一般情況，計算存活率，進行白細胞計數(shù)和分類，以酶聯(lián)免疫法測定血清TNF-α、IL-6含量，氣質(zhì)聯(lián)用法測定血清喹啉酸含量。

10、 結(jié)果：膿毒癥大鼠總死亡率為60％，存在術(shù)后12-24h及48-72h兩次死亡高峰；白細胞總數(shù)和中性粒細胞數(shù)分別在12h和36h達峰；血中TNF-(I、IL-6和喹啉酸水平分別在12h、36h和72h達峰?？咕幝?lián)合治療使膿毒癥大鼠死亡率降低至33％，對降低第二波死亡率尤其明顯；阻遏白細胞數(shù)和中性粒細胞數(shù)增加，降低TNF-α[和IL-6水平，平穩(wěn)降低喹啉酸水平。地塞米松處理增加大鼠死亡率(達到73％)，明顯抑制白細胞總數(shù)增加和升高中

11、性粒細胞數(shù)；其降低tNF-α作用不如抗菌藥處理組，但早期降低IL-6作用強于抗菌藥組，晚期則不如；地塞米松幾乎完全阻止了喹啉酸水平增高。 結(jié)論：抗菌藥聯(lián)合應(yīng)用明顯降低膿毒癥大鼠死亡率的部分原因可能與降低血中TNF-a和IL-6水平而保持喹啉酸在一定水平有關(guān)。地塞米松處理增加膿毒癥大鼠死亡率的部分原因可能與幾乎完全阻遏了血中喹啉酸增加有關(guān)。研究結(jié)果進一步提示，血清TNF-~、IL-6和喹啉酸濃度均與炎癥程度密切相關(guān)；喹啉酸在炎癥進