PI3K-Akt信號通路在七氟烷后處理減輕犬體外循環(huán)肺組織細(xì)胞凋亡中的作用.pdf

1、目的：探討七氟烷后處理對體外循環(huán)（CPB）犬肺功能、肺組織細(xì)胞凋亡情況及p-akt、cleaved-caspase3表達(dá)的影響，評價(jià)PI3K/Akt信號通路在七氟烷后處理減輕CPB犬肺損傷中的作用。
　　方法：實(shí)驗(yàn)用健康雜種犬24只，隨機(jī)分為4組（n=6），假手術(shù)組（C組）、缺血再灌注組（I/R組）、七氟烷后處理組（S組）及磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）抑制劑組（S+W組）。C組行機(jī)械通氣，胸骨正中開胸，其余不做任何處理，I/R組建

2、立CPB左肺缺血再灌注損傷模型，S組在開放左肺動(dòng)靜脈即刻行2％七氟烷后處理30min，S+W組在開放左肺動(dòng)靜脈前10分鐘給予PI3K抑制劑wortmannin0.16mg·kg-1泵注，開放左肺動(dòng)靜脈即刻行2%七氟烷后處理30min。于開胸前（T1）、開放左肺動(dòng)靜脈即刻（T2）及停機(jī)后2h（T3）取肺左下葉組織光鏡下觀察病理學(xué)變化，同時(shí)在各時(shí)點(diǎn)采集股動(dòng)脈血，行動(dòng)脈血?dú)夥治?，?jì)算呼吸指數(shù)（RI）和氧合指數(shù)（OI），采用蛋白質(zhì)印跡法（wes

3、tern blotting）檢測各時(shí)點(diǎn)肺組織p-Akt、cleaved-caspase3的表達(dá)，TUNEL法檢測各時(shí)點(diǎn)肺組織細(xì)胞凋亡情況。
　　結(jié)果:（1）各組犬呼吸參數(shù)的變化：T1時(shí)點(diǎn)各組犬RI和OI無明顯差異（P>0.05）；與T1時(shí)點(diǎn)比較，C組各時(shí)點(diǎn)RI及OI無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，I/R組、S組及S+W組T2、T3 RI明顯增加，OI明顯降低（P<0.05）；與T2比較，T3時(shí)點(diǎn)I/R組、S組及S+W組與I/R組RI明顯增加，OI則

4、相反（P<0.05）。四組同時(shí)點(diǎn)比較，與C組比較，T2、T3時(shí)點(diǎn)I/R組、S組及S+W組RI明顯增加，OI明顯降低（P<0.05）；與I/R組T3時(shí)點(diǎn)比較，S組RI降低，OI增加（P<0.05），S+W組RI和OI差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；與S組T3時(shí)點(diǎn)比較，S+W組RI增加，OI降低（P<0.05）。
　?。?）四組犬肺組織光鏡下病理改變：開胸前（T1時(shí)點(diǎn)），四組犬肺組織的結(jié)構(gòu)清晰，肺泡腔內(nèi)未見滲出，肺泡壁完整光滑，是正

5、常肺組織結(jié)構(gòu)；開放左肺動(dòng)靜脈后(T2時(shí)點(diǎn)），C組肺組織變化不明顯，其他三組肺組織部分出現(xiàn)了肺泡毛細(xì)血管擴(kuò)張，少量炎性細(xì)胞浸潤；實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)（T3時(shí)點(diǎn)），C組肺泡壁光滑完整，偶見炎性細(xì)胞，I/R與S+W組肺組織結(jié)構(gòu)紊亂，肺泡壁斷裂，肺泡腔塌陷并可見明顯的紅細(xì)胞以及大量炎性細(xì)胞浸潤； S組部分肺泡壁斷裂，少量炎性細(xì)胞及少量紅細(xì)胞滲出。
　　（3）四組犬肺組織 p-Akt、cleaved-caspase3的表達(dá)：開胸前各組犬 p-Akt和

6、cleaved-caspase3表達(dá)量極少，無明顯差異（P>0.05）；與 T1時(shí)點(diǎn)比較，C組各時(shí)點(diǎn)p-Akt，cleaved-caspase3表達(dá)無明顯差異（P>0.05），其余三組T2、T3時(shí)點(diǎn)肺組織p-Akt，cleaved-caspase3的表達(dá)明顯升高（P<0.05）。四組同時(shí)點(diǎn)比較，與C組比較，T2、T3時(shí)點(diǎn)R組、S組及S+W組肺組織p-Ak，cleaved-caspase3的表達(dá)增加（P<0.05）；與I/R組比較，T3時(shí)

7、點(diǎn)S組p-Akt表達(dá)增加（P<0.05），cleaved-caspase3表達(dá)降低（P<0.05），而S+W組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；與S組T3時(shí)點(diǎn)比較，應(yīng)用PI3K阻斷劑后S+W組p-Akt表達(dá)降低，cleaved-caspase3增加（P<0.05）。
　?。?）四組犬肺組織凋亡情況：與 T1時(shí)點(diǎn)比較，C組各時(shí)點(diǎn)無明顯差異（P>0.05），其余三組 T2、T3時(shí)點(diǎn)肺組織凋亡細(xì)胞數(shù)目增多，凋亡指數(shù)上升（P<0.05）；

8、 T3時(shí)點(diǎn)各組凋亡指數(shù)明顯高于T2時(shí)點(diǎn)（P<0.05）。四組同時(shí)點(diǎn)比較，與C組比較，I/R組、S組及S+W組T2、T3時(shí)點(diǎn)凋亡指數(shù)較C組高；與I/R組比，T3時(shí)點(diǎn)S組與S+W組凋亡指數(shù)明顯降低（P<0.05，）；應(yīng)用阻斷劑后，S組 T3時(shí)點(diǎn)比 S+W組凋亡指數(shù)降低（P<0.05）。
　　結(jié)論：七氟烷后處理可改善CPB后的肺功能，減少肺組織細(xì)胞凋亡，其機(jī)制可能與PI3K/Akt信號通路激活后上調(diào)p-Akt水平，抑制cleaved-c