版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis,AS)是一種與多種有生物活性的炎癥因子相關(guān)的慢性疾病,它導(dǎo)致的心腦血管疾病嚴(yán)重危害著人類的生命和健康。白細(xì)胞介素-8(Interleukin-8,IL-8)是引起動(dòng)脈粥樣硬化的主要炎癥因子之一,且IL-8沒有種屬特異性,在AS發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起著非常重要的作用。其中小鼠角質(zhì)細(xì)胞趨化因子KC(keratinocyte chemoattractant)是人IL-8的同系物。G3
2、1P是通過(guò)對(duì)人IL-8基因定點(diǎn)突變獲得的無(wú)活性產(chǎn)物,是人IL-8的類似物和拮抗劑,它能高效的親和其受體CXCR1/CXCR2。本實(shí)驗(yàn)室已在高脂血癥小鼠模型中發(fā)現(xiàn)G31P能下調(diào)細(xì)胞遷移相關(guān)因子MMP2、MMP9的mRNA水平,利用劃痕實(shí)驗(yàn)、Boyden Chamber實(shí)驗(yàn)和激光共聚集顯微鏡觀察到G31P對(duì)A7r5細(xì)胞遷移的影響。本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)動(dòng)脈粥樣硬化模型和A7r5細(xì)胞檢測(cè)G31P對(duì)細(xì)胞遷移及相關(guān)的因子MMP2、MMP9的作用。Rho相關(guān)
3、激酶(Rho-associated kinase,ROCK)作為RhoA下游的重要效應(yīng)分子,它除了參與肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架形成外,還參與調(diào)節(jié)增殖、細(xì)胞黏附和遷移等細(xì)胞功能,其通路在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生中具有重要的作用。而且研究證明,在PDGF引起ROCK1和ROCK2介導(dǎo)的細(xì)胞遷移中,ROCK1起主導(dǎo)作用,ROCK2無(wú)明顯變化。本實(shí)驗(yàn)還探尋了G31P是否通過(guò)Rho通路調(diào)節(jié)血管平滑肌細(xì)胞的遷移作用。本研究為揭示平滑肌細(xì)胞遷移分子機(jī)制提供理論依據(jù)
4、,并為動(dòng)脈粥樣硬化的預(yù)防和治療提供一個(gè)新思路。
方法:
1.體內(nèi)實(shí)驗(yàn):
建立動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)P?(1)動(dòng)脈粥樣硬化模型組(AS),取6周齡雄性ApoE-/-小鼠10只,喂養(yǎng)高脂飼料(普通飼料、豬油、蛋黃粉、膽固醇、豬膽汁鹽)12周。期間每周皮下注射生理鹽水3次,每半月秤量一次體重,每月通過(guò)眼眶內(nèi)取血收集血清。12周AS模型建立后,在乙醚麻醉下,眼球取血并取主動(dòng)脈。(2)G31P處理組(G31P),取6周齡雄性Ap
5、oE-/-小鼠10只,喂養(yǎng)處理同模型組,期間每周皮下注射G31P(500 ug/kg)3次。(3)對(duì)照組(control),6周齡雄性C57BL/6J小鼠8只,處理同模型組,期間普通飼料喂養(yǎng),每周皮下注射生理鹽水3次。
利用HE染色觀察主動(dòng)脈病理變化,以確定動(dòng)脈粥樣硬化模型建立是否成功。利用ELISA法檢測(cè)動(dòng)物血清中KCCIL-8)含量,同時(shí)用qRT-PCR及免疫組化方法檢測(cè)小鼠主動(dòng)脈中KC(IL-8)和其受體CXCR2以及M
6、MP2、MMP9的表達(dá)。
2.體外實(shí)驗(yàn):
利用培養(yǎng)的大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞系(A7r5),通過(guò)RT-PCR方法檢測(cè)在IL-8(50ng/mL)刺激下IL-8受體(CXCR2)在不同時(shí)間(0h、1h、3h、6h、12h、24h、36h、48h)的表達(dá)量。G31P(1000 ng/mL)預(yù)處理1h,IL-8(50 ng/mL)刺激A7r5細(xì)胞24h后,通過(guò)劃痕法觀察A7r5細(xì)胞的遷移,RT-PCR方法檢測(cè)A7r5細(xì)胞MM
7、P2、MMP9的表達(dá)量,通過(guò)Western blot檢測(cè)A7r5細(xì)胞ROCK1/ROCK2表達(dá)量。
結(jié)果:
1.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)
用高脂飼料喂養(yǎng)ApoE-/-小鼠12周后,通過(guò)病理組織學(xué)(HE染色)觀察發(fā)現(xiàn)正常組血管壁均勻結(jié)構(gòu)清晰,內(nèi)膜無(wú)脂質(zhì)條紋增生突起,中膜平滑肌細(xì)胞無(wú)增殖遷移,沒有疏松斑塊形成。動(dòng)脈粥樣硬化模型組主動(dòng)脈管壁結(jié)構(gòu)混亂,內(nèi)膜增生突起明顯,中膜平滑肌細(xì)胞增殖遷移出現(xiàn)的纖維斑塊,大量脂質(zhì)泡沫細(xì)胞形成的脂
8、紋脂斑。G31P處理組小鼠血管內(nèi)膜增生和脂質(zhì)條紋突起明顯改善。說(shuō)明成功建立了動(dòng)脈粥樣硬化模型。小鼠模型進(jìn)一步研究結(jié)果顯示:(1)與正常組相比,AS模型組小鼠體重增加明顯(P<0.01),而G31P處理組與AS模型組相比,小鼠體重下降顯著(P<0.01);(2)ELISA和qRT-PCR結(jié)果顯示,AS模型組與正常組相比血清中KC(IL-8)的含量和血管組織中的表達(dá)量明顯增加(P<0.05),而在G31P處理組,KC(IL-8)的表達(dá)量明顯
9、下調(diào)(P<0.05);(3)qRT-PCR和免疫組化結(jié)果顯示,AS模型組與正常組相比CXCR2及MMP2、MMP9的表達(dá)量都顯著增加(P<0.01),而G31P處理組,CXCR2及MMP2、MMP9在小鼠血管組織中的表達(dá)明顯下降(P<0.05)。
2.體外實(shí)驗(yàn)
RT-PCR實(shí)驗(yàn)顯示,IL-8刺激A7r5細(xì)胞可使CXCR2表達(dá)上調(diào);劃痕實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)IL-8顯著提高了A7r5細(xì)胞遷移的速率,而G31P卻降低了遷移的速率;用G
10、31P刺激IL-8誘導(dǎo)的A7r5細(xì)胞,RT-PCR結(jié)果顯示IL-8增加了MMP2、MMP9的表達(dá)量(P<0.01),而G31P降低了MMP2、MMP9的表達(dá)量(P<0.05);通過(guò)G31P作用IL-8介導(dǎo)的A7r5細(xì)胞,用Western blot方法發(fā)現(xiàn)IL-8增加了ROCK1/ROCK2的表達(dá)量(P<0.01),而G31P降低了ROCK1/ROCK2的蛋白表達(dá)量(P<0.01)。
結(jié)論:
1.高脂飼料喂養(yǎng)雄性Apo
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 重組人CXCR1-2拮抗劑G31P調(diào)節(jié)平滑肌細(xì)胞增殖、遷移及相關(guān)分子機(jī)制研究.pdf
- CXCR1-CXCR2受體拮抗劑—G31P對(duì)小鼠綠膿桿菌肺炎的治療.pdf
- CXCR1-CXCR2受體拮抗劑—G31P對(duì)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞抑制機(jī)制的探研.pdf
- CXCR1-CXCR2受體拮抗劑-G31P對(duì)豚鼠肺炎克雷伯桿菌肺炎的抑制作用.pdf
- IL-8介導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞遷移機(jī)制及G31P的作用初探.pdf
- CXCR1-CXCR2拮抗劑-G31P對(duì)體外培養(yǎng)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞增殖及基質(zhì)金屬蛋白酶-2表達(dá)的影響.pdf
- CXCR1-2拮抗劑G31P對(duì)糖尿病腎病小鼠腎損傷的作用研究.pdf
- CXCR1-2拮抗劑G31P對(duì)獲得性大皰性表皮松懈癥皮膚損傷的影響.pdf
- ET-1及其受體拮抗劑對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增殖和凋亡的影響.pdf
- CXCR1-2拮抗劑G31P聯(lián)合GDCO941對(duì)乳腺癌治療的增強(qiáng)作用.pdf
- CXCR1-2拮抗劑G31P對(duì)順鉑誘導(dǎo)荷瘤小鼠腎損傷模型保護(hù)作用的研究.pdf
- SDF-1α-CXCR4對(duì)THP-1細(xì)胞遷移及其與血管平滑肌細(xì)胞黏附的影響.pdf
- CXCR1-2拮抗劑G31P在小鼠特應(yīng)性皮炎中抗炎作用的研究.pdf
- ROCKⅠ對(duì)PDGF介導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞遷移分子機(jī)制的研究.pdf
- miR-3568對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增殖和遷移的影響及分子機(jī)制研究.pdf
- CXCR1-2拮抗劑G31P聯(lián)合吉非替尼對(duì)博來(lái)霉素導(dǎo)致的小鼠肺損傷抗的研究.pdf
- AngⅡ受體拮抗劑坎地沙坦對(duì)高糖誘導(dǎo)大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響及機(jī)制研究.pdf
- Caveolae對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響及可能機(jī)制.pdf
- 纈沙坦對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增殖、遷移及p-ERK1-2、p-P38表達(dá)的影響.pdf
- HSP60與血管平滑肌細(xì)胞增殖及遷移分子機(jī)制的研究.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論