紫花松果菊對(duì)大鼠血管平滑肌細(xì)胞炎癥影響及其機(jī)制初探.pdf

1、血管平滑肌是血管壁的主要成分,血管平滑肌細(xì)胞的炎癥能引起平滑肌細(xì)胞的增殖與遷移,最終導(dǎo)致血管病變動(dòng)脈粥樣硬化和血管手術(shù)后狹窄等問題;紫花松果菊作為松果菊主要藥用種,被國(guó)內(nèi)外普遍認(rèn)為具有增強(qiáng)細(xì)胞免疫、治療各種炎癥和感染作用。本文對(duì)大鼠血管平滑肌細(xì)胞進(jìn)行了原代培養(yǎng)與鑒定;研究了紫花松果菊揮發(fā)油及菊苣酸對(duì)脂多糖引起大鼠血管平滑肌細(xì)胞炎癥的影響,并初步探討了其抗炎機(jī)制。具體研究結(jié)果如下:
　　1.建立了大鼠血管平滑肌細(xì)胞系。通過酶消化法分

2、離細(xì)胞,采用自然純化法純化平滑肌細(xì)胞,結(jié)果顯示大鼠血管平滑肌細(xì)胞呈典型的“谷峰狀”生長(zhǎng)。對(duì)第5代細(xì)胞進(jìn)行免疫組化鑒定,染色結(jié)果顯示胞漿內(nèi)α平滑肌肌動(dòng)蛋白陽(yáng)性表達(dá),表明血管平滑肌細(xì)胞系建立成功。
　　2.研究了紫花松果菊揮發(fā)油與菊苣酸對(duì)血管平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,確定了其藥用濃度范圍。采用MTT法檢測(cè)其對(duì)血管平滑肌細(xì)胞的增殖影響,結(jié)果表明:紫花松果菊揮發(fā)油的濃度低于0.01％時(shí),對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)無抑制影響;菊苣酸的濃度低于15.0μg/ml

3、時(shí),對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)無抑制影響。
　　3.建立了脂多糖刺激血管平滑肌細(xì)胞引起的炎癥模型。通過脂多糖刺激血管平滑肌細(xì)胞引起炎癥的最適濃度與時(shí)間的研究,并采用實(shí)時(shí)定量熒光PCR檢測(cè)IL-6mRNA表達(dá)量,確定了最適脂多糖刺激濃度為5μg/ml,最適時(shí)間為1h。
　　4.通過實(shí)時(shí)定量熒光PCR檢測(cè)促炎細(xì)胞因子mRNA的表達(dá),研究了紫花松果菊揮發(fā)油和菊苣酸對(duì)血管平滑肌細(xì)胞炎癥的影響。結(jié)果表明:揮發(fā)油濃度為0.005%時(shí),與模型組相比,TN

4、F-αmRNA的表達(dá)量下降了66.5%,IL-6mRNA的表達(dá)量下降了37.0%,COX-2mRNA的表達(dá)量下降了35.5%;揮發(fā)油濃度為0.01%時(shí),與模型組相比,TNF-αmRNA的表達(dá)量下降了77.3%,IL-6mRNA的表達(dá)量下降了52.6%,COX-2mRNA的表達(dá)量下降了40.8%。菊苣酸濃度為5μg/ml時(shí),與模型組相比,TNF-αmRNA的表達(dá)量下降了56.9%,IL-6mRNA的表達(dá)量下降了34.4%,COX-2mRN

5、A的表達(dá)量下降了29.0%;菊苣酸濃度為15μg/ml時(shí),與模型組相比,TNF-αmRNA的表達(dá)量下降23.1%,IL-6mRNA的表達(dá)量下降了29.5%,COX-2mRNA的表達(dá)量下降了46.6%。表明紫花松果菊揮發(fā)油與菊苣酸均能下調(diào)促炎細(xì)胞因子mRNA的表達(dá),從而抑制炎癥反應(yīng)。
　　5.通過Westernblot檢測(cè)NF-κB/p65、p38/MAPK蛋白的表達(dá)差異,初步探討了紫花松果菊揮發(fā)油和菊苣酸抑制血管平滑肌細(xì)胞炎癥的機(jī)

6、制。結(jié)果表明:揮發(fā)油濃度為0.005%時(shí),與模型組相比,NF-κb/p65蛋白表達(dá)降低了19.5%,p38/MAPK蛋白表達(dá)降低了14.0%;揮發(fā)油濃度為0.01%時(shí),與模型組相比,NF-κb/p65蛋白表達(dá)降低了30.3%,p38/MAPK蛋白表達(dá)降低了19.8%。菊苣酸濃度為5μg/ml時(shí),與模型組相比,NF-κb/p65蛋白表達(dá)降低了30.3%,p38/MAPK蛋白表達(dá)降低了11.9%;菊苣酸濃度為15μg/ml時(shí),與模型組相比,