紫花松果菊對大鼠血管平滑肌細胞炎癥影響及其機制初探.pdf

1、血管平滑肌是血管壁的主要成分,血管平滑肌細胞的炎癥能引起平滑肌細胞的增殖與遷移,最終導致血管病變動脈粥樣硬化和血管手術后狹窄等問題;紫花松果菊作為松果菊主要藥用種,被國內外普遍認為具有增強細胞免疫、治療各種炎癥和感染作用。本文對大鼠血管平滑肌細胞進行了原代培養(yǎng)與鑒定;研究了紫花松果菊揮發(fā)油及菊苣酸對脂多糖引起大鼠血管平滑肌細胞炎癥的影響,并初步探討了其抗炎機制。具體研究結果如下:
　　1.建立了大鼠血管平滑肌細胞系。通過酶消化法分

2、離細胞,采用自然純化法純化平滑肌細胞,結果顯示大鼠血管平滑肌細胞呈典型的“谷峰狀”生長。對第5代細胞進行免疫組化鑒定,染色結果顯示胞漿內α平滑肌肌動蛋白陽性表達,表明血管平滑肌細胞系建立成功。
　　2.研究了紫花松果菊揮發(fā)油與菊苣酸對血管平滑肌細胞生長的影響,確定了其藥用濃度范圍。采用MTT法檢測其對血管平滑肌細胞的增殖影響,結果表明:紫花松果菊揮發(fā)油的濃度低于0.01％時,對細胞生長無抑制影響;菊苣酸的濃度低于15.0μg/ml

3、時,對細胞生長無抑制影響。
　　3.建立了脂多糖刺激血管平滑肌細胞引起的炎癥模型。通過脂多糖刺激血管平滑肌細胞引起炎癥的最適濃度與時間的研究,并采用實時定量熒光PCR檢測IL-6mRNA表達量,確定了最適脂多糖刺激濃度為5μg/ml,最適時間為1h。
　　4.通過實時定量熒光PCR檢測促炎細胞因子mRNA的表達,研究了紫花松果菊揮發(fā)油和菊苣酸對血管平滑肌細胞炎癥的影響。結果表明:揮發(fā)油濃度為0.005%時,與模型組相比,TN

4、F-αmRNA的表達量下降了66.5%,IL-6mRNA的表達量下降了37.0%,COX-2mRNA的表達量下降了35.5%;揮發(fā)油濃度為0.01%時,與模型組相比,TNF-αmRNA的表達量下降了77.3%,IL-6mRNA的表達量下降了52.6%,COX-2mRNA的表達量下降了40.8%。菊苣酸濃度為5μg/ml時,與模型組相比,TNF-αmRNA的表達量下降了56.9%,IL-6mRNA的表達量下降了34.4%,COX-2mRN

5、A的表達量下降了29.0%;菊苣酸濃度為15μg/ml時,與模型組相比,TNF-αmRNA的表達量下降23.1%,IL-6mRNA的表達量下降了29.5%,COX-2mRNA的表達量下降了46.6%。表明紫花松果菊揮發(fā)油與菊苣酸均能下調促炎細胞因子mRNA的表達,從而抑制炎癥反應。
　　5.通過Westernblot檢測NF-κB/p65、p38/MAPK蛋白的表達差異,初步探討了紫花松果菊揮發(fā)油和菊苣酸抑制血管平滑肌細胞炎癥的機

6、制。結果表明:揮發(fā)油濃度為0.005%時,與模型組相比,NF-κb/p65蛋白表達降低了19.5%,p38/MAPK蛋白表達降低了14.0%;揮發(fā)油濃度為0.01%時,與模型組相比,NF-κb/p65蛋白表達降低了30.3%,p38/MAPK蛋白表達降低了19.8%。菊苣酸濃度為5μg/ml時,與模型組相比,NF-κb/p65蛋白表達降低了30.3%,p38/MAPK蛋白表達降低了11.9%;菊苣酸濃度為15μg/ml時,與模型組相比,