鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)磷脂酶及酶解大豆卵磷脂的條件的優(yōu)化.pdf

1、大豆磷脂是從大豆中提取的含磷的脂類物質(zhì)的混合物，出于其獨(dú)特的理化性質(zhì)，在食品工業(yè)中的應(yīng)用已有很長(zhǎng)的歷史?，F(xiàn)在國(guó)內(nèi)外市售的卵磷脂主要是以大豆磷脂為主。雖然磷脂作為乳化劑，已廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、化妝品、皮革、涂料等領(lǐng)域，但普通大豆磷脂親水性不夠理想，使大豆磷脂的應(yīng)用受到了限制。 解決此難題的方法之一就是對(duì)磷脂進(jìn)行改性，提高磷脂的親水性。改性方法包括物理改性、化學(xué)改性和酶法改性。由于前兩種方法存在著一些安全性等方面的缺陷，已逐漸被淘

2、汰。酶法改性是利用磷脂酶裂解磷脂分子中的脂肪酸基團(tuán)使之轉(zhuǎn)化成為溶血磷脂，與普通磷脂相比，溶血磷脂在乳化、抑菌等方面的性能均有明顯改善。磷脂的酶法改性具有反應(yīng)條件溫和，速度快，進(jìn)行完全，副產(chǎn)物少等特點(diǎn)，作為一種綠色、環(huán)保的方法有著廣泛的發(fā)展前景和重要的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)價(jià)值。 為了能夠利用微生物發(fā)酵，大量生產(chǎn)PLA2并應(yīng)用于生產(chǎn)，本實(shí)驗(yàn)室李維琳老師從紫紅鏈霉菌(Streptomycesviolaceoruber)中克隆出PLA2的基因并將

3、其在異源宿主中進(jìn)行表達(dá)，構(gòu)建PLA2的高產(chǎn)菌株。本實(shí)驗(yàn)是在上述工作的基礎(chǔ)上進(jìn)行的，先發(fā)酵該高產(chǎn)菌株制備磷脂酶，并用磷脂酶對(duì)大豆磷脂進(jìn)行水解，采用靜態(tài)水浴反應(yīng)對(duì)酶解工藝進(jìn)行了系統(tǒng)研究。優(yōu)化出鏈霉菌發(fā)酵產(chǎn)酶和酶水解大豆磷脂的最佳條件，為溶血磷脂的工業(yè)化生產(chǎn)奠定了重要的實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)。本論文完成了下述研究工作：利用重組變鉛青鏈霉菌發(fā)酵來制備磷脂酶A2。對(duì)一些發(fā)酵參數(shù)進(jìn)行了摸索，該菌株的最佳搖瓶發(fā)酵條件為：培養(yǎng)基(黃豆餅粉)濃度2％、培養(yǎng)基起始pH

4、值8.0、接種量5％、裝瓶量100ml培養(yǎng)基/250ml三角瓶，接種后55h左右酶的活力達(dá)到0.95IU/ml。 以大豆磷脂為底物，發(fā)酵得到的磷脂酶A2為工具酶，采用靜態(tài)水浴反應(yīng)的方式，進(jìn)行了酶改性研究。大豆磷脂的最佳水解工藝條件為：底物濃度為4％，酶濃度為0.10IU/ml，反應(yīng)溫度30℃，起始pH值7.5，Ca2+濃度0.03％，反應(yīng)時(shí)間11h。在最佳反應(yīng)條件下，得到的產(chǎn)物經(jīng)酸堿滴定法及HPLC檢測(cè)，大豆磷脂的轉(zhuǎn)化率為86.