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文檔簡介
1、背景:慢性增強型體外反搏(EECP)作為一種有效的非藥物治療手段已被列入AHA穩(wěn)定型心絞痛治療指南,但其治療冠心病/心絞痛的確切機制,尤其是分子機制大部分仍不清楚。體外細胞培養(yǎng)發(fā)現(xiàn),適當?shù)那袘Υ碳た梢餎Cs生物學特性改變,包括形態(tài)學改變和基因表達及蛋白質合成、分泌的變化,如一些抗AS基因/蛋白質表達的上調。眾所周知,EECP可提高血流切應力。因此,我們假設慢性EECP通過調節(jié)ECs相關蛋白質合成、分泌,修復受損的內皮,從而拮抗AS形
2、成。 目的:1、建立豬慢性體外反搏模型;2、觀察慢性EECP對高脂血癥豬血管AS病變的影響;3、觀察慢性EECP對高脂血癥豬血管ECs形態(tài)的影響;4,觀察慢性EECP對血脂代謝的影響;5、利用蛋白質組學手段檢測慢性EECP對高脂血癥豬胸主動脈ECs合成的影響。 方法:19頭3.5月齡豬,在肌肉注射速眠新Ⅱ(846合劑)和靜脈注射3%戊巴比妥鈉麻醉下,用0.035MPa/cm2的壓力進行反搏,每次反搏2h,隔天反搏1次,共
3、計36h。另有39只乳豬隨機分為正常對照組(簡稱正常組,n=8)、高脂對照組(簡稱高脂組,n=12)和高脂反搏組(簡稱反搏組,n=19)。給予高脂飼料喂養(yǎng)建造豬高膽固醇血癥模型,反搏組動物按照上述方案對反搏組豬進行EECP。反搏36h后,心腔注射過量的10%氯化鉀處死動物,取腹主動脈進行大體蘇丹染色,取冠狀動脈前降支(LAD)進行HE染色及掃描電鏡和透射電鏡檢查,收聚用膠原酶消化的胸主動脈ECs進行蛋白質組學檢測,同時檢測反搏前和反搏3
4、6h后動物血脂水平和肝腎功能。 結果:EECP按照預定的方案順利完成,并獲得了標準的反搏指脈波形、頸動脈的壓力和血流曲線及頸動脈血流多普勒頻譜,同時反搏前后反映肝腎功能的指標無顯著變化。大體蘇丹染色發(fā)現(xiàn),反搏組腹主動脈AS病變面積百分比和大體病變積分明顯低于高脂組,卻顯著高于正常組。HE染色發(fā)現(xiàn),反搏組顯微病變積分明顯低于高脂組,而顯著高于正常組;高脂組冠狀動脈可見典型的AS斑塊造成血管腔狹窄,反搏組僅見局部內膜增厚。掃描電鏡發(fā)
5、現(xiàn),高脂組冠狀動脈ECs排列紊亂,ECs脫落明顯,內皮損傷嚴重;反搏組冠狀動脈ECs沿血流切應力方向呈流線型排列,ECs脫落顯著減少,內皮損傷較輕。透射電鏡檢查發(fā)現(xiàn),高脂組冠狀動脈ECs凋亡、脫落,ECs間連接斷裂,內膜破損,平滑肌細胞侵入和增生,形成平滑肌源性泡沫細胞;反搏組冠狀動脈ECs呈梭形,內皮與內皮下結構連接緊密,內膜增厚,平滑肌輕度增生。血脂監(jiān)測發(fā)現(xiàn),反搏36h后,反搏組TC、LDL、和TG均顯著低于高脂組卻顯著高于正常組,
6、HDL則顯著高于其它兩組;高脂組TG、LDL增加程度明顯高于反搏組;高脂組的HDL輕度下降,而反搏組的HDL明顯升高;高脂組的TG增加,而反搏組的TG顯著降低。蛋白質組學檢測發(fā)現(xiàn),反搏組動物胸主動脈ECs有7種高表達的蛋白質,其中有些屬于與細胞的變形、遷移和粘附有關的細胞骨架系統(tǒng),如Vimentin、Moesin和LPP等;有些與細胞的生長有關,如AK1、LBP和Moesin等;有些是細胞代謝相關的酶,如AAP、2,3-BPGM和AK1
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