微脈管浸潤對小肝癌病人預(yù)后的影響及MicroRNA對微脈管浸潤的預(yù)測作用.pdf

1、本文主要從以下四個部分展開論述：
　　第一部分 小肝癌病人預(yù)后分析
　　目的：探索小肝癌病人預(yù)后影響因素。
　　方法：回顧性分析287例行根治性手術(shù)切除的小肝癌病人的臨床病理特征，包括臨床資料(年齡、性別、病毒感染、血清甲胎蛋白水平(AFP)、周圍肝硬化、腫瘤包膜以及邊界），病理學(xué)資料(腫瘤病理學(xué)分化、形態(tài)學(xué)亞型、微脈管浸潤(MVI)、腫瘤炎癥細胞浸潤(TIL)、周圍肝炎癥以及硬化分級），分析上述臨床病理因素對小肝癌病

2、人預(yù)后的影響及與MVI的關(guān)系。
　　結(jié)果：287位病人中，238(82.9％)位為男性，49(17.1％)位為女性，中位年齡52歲。疾病無進展生存(PFS)以及總體生存中位時間(OS)均為54個月。94.0％(268/287)病人有乙型肝炎病毒感染;280位(280/287)具有術(shù)前AFP水平記錄的病人中，102位(36.4％)病人AFP水平≥200ug/ml;180位(180/287)病人具有術(shù)后AFP水平記錄，其中119位(6

3、6.1％)病人AFP水平≥20ug/ml。89.5％(257/287)位病人周圍肝有硬化。283位(283/287)具有腫瘤包膜記錄的病人中，165位(58.3％)病人腫瘤包膜完整，118位(41.7％)病人腫瘤具有部分包膜。97.8％(272/287)病人腫瘤具有完整的推擠性邊界。46位(16.0％)病人發(fā)現(xiàn)MVI。
　　單因素分析提示，有MVI的病人PFS縮短(P值為0.019)。有MVI的肝癌病人中，女性病人(P=0.000

4、、0.003)、術(shù)后血清AFP水平≥20ug/ml(P=0.011、0.008)、TIL≥50/HPF（P=0.000、0.019）、腫瘤邊界清楚（P=0.004、0.043）、腫瘤分化為G1/G2級(P=0.013、0.012)的病人，PFS以及OS較無MVI的病人縮短。周圍肝有硬化且有MVI的肝癌病人，PFS時間縮短（P=0.003）。年齡＜50歲的肝癌病人，MVI對其PFS有統(tǒng)計學(xué)差異的影響（P=0.028）。
　　結(jié)論：<

5、br>　　1.MVI是小肝癌病人PFS的獨立預(yù)后影響因素。
　　2.有MVI肝癌病人中，女性、術(shù)后AFP水平≥20ug/ml、TIL≥50個/HPF、腫瘤邊界清楚、腫瘤中分化的病人的PFS及OS較無MVI病人縮短。MVI對周圍肝有硬化或年齡＜50歲的肝癌病人的PFS的影響有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　第二部分 新鮮肝癌以及癌栓組織microRNA的篩選
　　目的：篩選肝癌和癌栓組織中表達有差異的microRNA。
　　方法

6、：收集16例新鮮肝癌組織和癌栓組織，提取總RNA后，應(yīng)用Real-timeRT-PCR獲得基因表達的CT值，以U47作為內(nèi)參，根據(jù)目的基因在對比組織間相對表達量的升高、降低分為兩組，應(yīng)用非配對t檢驗進行分析。
　　結(jié)果：1.在新鮮肝癌組織和癌栓組織中分析723種microRNA的差異表達，發(fā)現(xiàn)19種microRNA在兩組組織間的相對表達量有統(tǒng)計學(xué)差異(p＜0.05)，其中15種microRNA在癌栓組織中的表達顯著低于肝癌組織，分

7、別為hsa-miR-125a-3p(P=0.01)、hsa-miR-575(P=0.03)、hsa-miR-320(P=0.02)、hsa-miR-122(P=0.01)、hsa-let-7c(P=0.03)、hsa-miR-338-3p(P=0.02)、hsa-miR-26a(P=0.02)、hsa-miR-486-5p(P=0.00)、hsa-miR-202(P=0.04)、hsa-miR-765(P=0.02)、hsa-miR-1

8、25b-2*(P=0.01)、hsa-miR-564(P=0.03)、hsa-miR-342-5p(P=0.03)、hsa-miR-623（P=0.03）、hsa-miR-7-1*(P=0.01)，4種microRNA在癌栓組織中的表達顯著高于肝癌組織，分別為hsa-miR-21(P=0.00)、hsa-miR-551b（P=0.04）、hsa-miR-27a(P=0.00)、hsa-miR-876-3p(P=0.04)。
　　2

9、.選擇在癌栓與肝癌組織中表達差異最大的兩種microRNA，即hsa-miR-125a-3p、hsa-miR-575作為目的microRNA，在石蠟標本中進一步驗證。
　　結(jié)論：1.在723種microRNA中，發(fā)現(xiàn)19種microRNA在肝癌以及癌栓組織之間的相對表達量具有統(tǒng)計學(xué)差異，其中15種microRNA在癌栓組織中的表達顯著低于肝癌組織，分別為hsa-miR-125a-3p、hsa-miR-575、hsa-miR-320

10、、hsa-miR-122、hsa-let-7c、hsa-miR-338-3p、hsa-miR-26a、hsa-miR-486-5p、hsa-miR-202、hsa-miR-765、hsa-miR-125b-2*、hsa-miR-564、hsa-miR-342-5p、hsa-miR-623、hsa-miR-7-1*，4種microRNA在癌栓組織中的表達顯著高于肝癌組織，分別為hsa-miR-21、hsa-miR-551b、hsa-miR

11、-27a、hsa-miR-876-3p。
　　2.選擇hsa-miR-125a-3p、hsa-miR-575作為目的microRNA，在肝癌石蠟標本中進一步驗證。
　　第三部分 目的microRNA與肝癌病人臨床病理因素相關(guān)性分析
　　目的：在石蠟標本中驗證miR125A-3P及miR575的表達，并分析microRNA的差異表達與肝癌病人臨床病理因素的相關(guān)性。
　　方法：用顯微切割的方法收集36例石蠟標本的HC

12、C、MVI、Non-tumor，應(yīng)用RT-PCR方法獲得基因表達的CT值，以U47作為內(nèi)參，通過計算，獲得目的基因在MVI、HCC、Non-tumor組織間的變化趨勢。應(yīng)用Fisher's exact test分析基因表達的高低與肝癌病人臨床病理因素間的相關(guān)性。
　　結(jié)果：1.36例肝癌病人，男性病人31例，女性病人5例，中位年齡為50歲。33例病人有HBV感染，其余3例無肝炎病毒感染。22例病人有肝硬化，14例病人周圍肝無硬化。

13、18例病人有微脈管浸潤。
　　2.通過顯微切割技術(shù)獲得純凈的標本，所抽提石蠟組織總RNA濃度為4.1-422.1 ng/ul。
　　3.在HCC以及非癌肝組織中，miR125A-3P、miR575的相對表達與性別、年齡、肝硬化、腫瘤組織學(xué)分化程度、有無MVI以及TIL無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　4.18例有癌栓肝癌病人中，miR125A-3P在TIL≥50個/HPF以及＜50個/HPF兩組病人的MVI以及非癌肝組織間具有統(tǒng)計學(xué)

14、差異。
　　結(jié)論：
　　1.miR125A-3P、miR575在有癌栓肝癌病人MVI組織中的相對表達量低于HCC以及非癌肝組織，在非癌肝組織中的相對表達量最高。
　　2.miR125A-3P、miR575在無癌栓肝癌病人HCC組織中的相對表達量低于非癌肝組織。
　　3.miR125A-3P在有癌栓肝癌病人TIL≥50個/HPF以及＜50個/HPF兩組病人的MVI、非癌肝組織間具有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　第四部分

15、石蠟組織中目的microRNA表達差異分析
　　目的：探討miR125A-3P和miR575在有無癌栓兩組肝癌病人HCC、MVI以及非癌肝組織中的表達差異。
　　方法：應(yīng)用顯微切割技術(shù)收集肝癌病人的HCC、MVI以及Non-tumor FFPE標本，行RT-PCR獲得基因表達的CT值，以U47作為內(nèi)參，通過配對t檢驗，探索目的基因在MVI、HCC和Non-tumor組織間的變化趨勢。
　　結(jié)果：1.有癌栓肝癌病人MVl

16、、HCC、Non-tumor組織三組樣本兩兩配對，miR125A-3P在MVI組織中的表達均低于HCC和非癌肝組織，P值分別為0.0053、0.0542。miR575也顯示出來同樣的表達趨勢，P值分別為0.1211、0.2947。miR125A-3P和miR575在HCC組織中的表達均低于非癌肝組織，P值分別為0.4433、0.3394;0.1945、0.4934。
　　2.miR125A-3P、miR575在有癌栓病人HCC以及

17、非癌肝組織中的相對表達量均高于無癌栓組肝癌病人對應(yīng)組織，兩組病人HCC與非癌肝組織中miR125A-3P的相對表達量均具有統(tǒng)計學(xué)差異，P值分別為0.0021、0.0336。miR575在兩組病人間HCC與非癌肝組織中的相對表達量無統(tǒng)計學(xué)差異，P值分別為0.1478、0.2977。
　　結(jié)論：
　　1.miR125A-3P在有癌栓肝癌病人MVI與HCC組織中的表達具有明顯差異，miR575未顯示出統(tǒng)計學(xué)差異。兩種基因在有癌栓肝