女性dystrophinopathy的臨床、病理和基因研究.pdf

1、目的
　　Dystrophinopathy是一組因抗肌萎縮蛋白(dystrophin)基因發(fā)生突變引起dystrophin缺陷所導(dǎo)致的一組遺傳性疾病。Dystrophin基因位于Xp21.2，dystrophinopathy遺傳方式為X連鎖隱性遺傳，絕大多數(shù)患者為男性，臨床表現(xiàn)型包括Duchenne型肌營(yíng)養(yǎng)不良(DuchenneMuscularDystrophy，DMD)，Becker型肌營(yíng)養(yǎng)不良(BeckerMuscularDy

2、strophy，BMD)，DMD相關(guān)擴(kuò)張型心肌病(DMD-associateddilatedcardiomyopathy，DCM)。作為一種X連鎖隱性遺傳病，女性攜帶者不應(yīng)該出現(xiàn)表型。然而，約8％可出現(xiàn)不同程度的癥狀，稱為有癥狀攜帶者(manifestingcarriers，MCs)，這其中2％可無該病家族史。對(duì)于有癥狀攜帶者來說，其臨床表現(xiàn)相差很大。嚴(yán)重者可類似典型DMD表現(xiàn)，輕者可僅表現(xiàn)為無癥狀的高CK血癥。
　　本研究選取7

3、例臨床病理診斷為女性dystrophinopathy的病人，利用免疫學(xué)方法檢測(cè)病人肌肉中dystrophin的表達(dá)并與男性Duchenne型肌營(yíng)養(yǎng)不良、Becker型肌營(yíng)養(yǎng)不良進(jìn)行比較，其中兩例病人骨骼肌病理dystrophin表現(xiàn)為典型Duchenne型肌營(yíng)養(yǎng)不良，通過核型分析、基因檢測(cè)等方法對(duì)其發(fā)病機(jī)制進(jìn)行探討。
　　材料和方法
　　選取了山東大學(xué)齊魯醫(yī)院神經(jīng)肌肉病研究室接診的7例臨床和病理診斷為dystrophinop

4、athy的女性病人的肌肉標(biāo)本，另選病理報(bào)告正常的肌肉標(biāo)本1例、男性Duchenne型肌營(yíng)養(yǎng)不良1例、男性Becker型肌營(yíng)養(yǎng)不良1例作為對(duì)照。將在液氮預(yù)冷后異戊烷速凍的冰凍肌肉標(biāo)本制成4um冰凍切片，利用抗dystrophinC-terminal、dystrophinRod、dystrophinN-terminal的單克隆抗體做免疫組織化學(xué)染色(IHC)，并對(duì)其中部分病人提取肌組織總蛋白行dystrophin蛋白印跡分析(western

5、blot，WB)。對(duì)部分病例行核型分析、基因檢測(cè)、X染色體失活分析，以明確其發(fā)病機(jī)制。
　　結(jié)果:
　　IHC結(jié)果分析:7例女性dystrophinopathy病人的肌肉組織中，2例表現(xiàn)為dystrophin完全缺失，5例為部分缺失。
　　WB結(jié)果分析:對(duì)2例dystrophin完全缺失，2例部分缺失、1例男性Duchenne型肌營(yíng)養(yǎng)不良、1例正常對(duì)照行dystrophin蛋白印跡分析。其中2例女性Duchenne型肌

6、營(yíng)養(yǎng)不良dystrophin完全缺失與IHC結(jié)果一致。
　　核型分析及基因檢測(cè)結(jié)果:病例1行DMDMLPA檢測(cè)未見異常，核型分析結(jié)果為46,x,t(x;10)(p22.1;pter)。病例2行DMDMLPA檢測(cè)及核型分析均未見異常;DMD基因NGS測(cè)序檢測(cè)到外顯子編碼區(qū)的一個(gè)雜合突變:c.10223+1G＞A，同時(shí)檢測(cè)到一個(gè)雜合變異:c.2149G＞T;外周血X染色體失活偏好檢測(cè):父源性X染色體甲基化程度較低，母源性X染色體甲基化

7、程度較高，二者比例約為10∶90。母源X染色體失活程度高，父源X染色體失活程度低;微陣列比較基因組雜交檢測(cè)未見異常。
　　結(jié)論:
　　1.本研究7例女性dystrophinopathy，2例免疫組化染色表現(xiàn)與男性DMD患者相似，5例表現(xiàn)為dystrophin染色陽性纖維與陰性纖維鑲嵌分布。
　　2.對(duì)于女性攜帶者，已報(bào)道的病例發(fā)病機(jī)制為:涉及p21.2的缺失;涉及Xp21.2的染色體重排或一條X染色體完全缺失;X染色體

8、為單親二倍體(UPD);帶有兩個(gè)DMD基因突變的復(fù)合雜合子;非隨機(jī)的X染色體失活(XCI);AR受體突變導(dǎo)致的男性假兩性畸形。本研究中的2例病人的發(fā)病機(jī)制為其中兩種。
　　3.對(duì)于本研究的7個(gè)病例，臨床表現(xiàn)和肌活檢抗dystrophin染色之間沒有明顯的相關(guān)性，除兩個(gè)肌活檢表現(xiàn)為dystrophin基本完全缺失的病例的CK值明顯較其他病例高外，臨床癥狀的嚴(yán)重程度與肌活檢表現(xiàn)并未發(fā)現(xiàn)確定的關(guān)系。
　　4.女性dystrophi

9、nopathy的診斷具有重大的臨床意義。對(duì)于高CK血癥的女性患者伴或不伴有肌無力可建議行肌肉活檢檢測(cè)其dystrophin有無缺失，絕大多數(shù)女性dystrophinopathy預(yù)后較好，但其患擴(kuò)張型心肌病的可能性較正常人明顯升高，應(yīng)早診斷、早監(jiān)測(cè)、早治療。
　　5.dystrophinopathy確定的基因和遺傳方式使得女性dystrophinopathy可通過遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷來避免或降低DMD/BMD患兒或DMD/BMD攜帶者