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文檔簡介
1、目的：檢測膠質(zhì)瘤擴(kuò)增序列41(Glioma-amplifiedsequence41，GAS41)基因在不同病理級別的神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織及神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中的表達(dá)，探討GAS41基因在神經(jīng)膠質(zhì)瘤發(fā)展中的作用。
方法：(1)采用免疫組織化學(xué)染色法、Westernblot從蛋白水平檢測30例不同病理級別的神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織中GAS41的表達(dá)情況。
(2)通過Westernblot檢測神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中GAS41的表達(dá)情況，
2、并通過分子克隆技術(shù)構(gòu)建GAS41基因的RNA干擾慢病毒載體GV118-GAS41-RNAi，連同包裝質(zhì)粒pHelper1.0和包膜質(zhì)粒pHelper2.0共同轉(zhuǎn)染293T包裝細(xì)胞，收集儲存可表達(dá)GAS41特異性干擾慢病毒載體的病毒顆粒并進(jìn)行滴度測定。
結(jié)果：(1)GAS41蛋白在高級別神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)強(qiáng)于低級別神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.011<0.05)。
(2)GAS41在神經(jīng)膠質(zhì)瘤
3、細(xì)胞系A(chǔ)172中表達(dá)較高，構(gòu)建的GAS41干擾慢病毒載體GV118-GAS41-RNAi經(jīng)PCR鑒定和測序，結(jié)果與設(shè)計序列完全相符，慢病毒重組載體構(gòu)建成功，將GV118-GAS41-RNAi、pHelper1.0和pHelper2.0三質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染293T包裝細(xì)胞后，收獲病毒并測定病毒滴度為5×108TU/ml。
結(jié)論：(1)GAS41在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的表達(dá)水平隨著腫瘤惡性程度的增高而增強(qiáng)，提示GAS41的表達(dá)量也許可以作為
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