前列腺素E-,2-對T淋巴細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用以及對異基因造血干細(xì)胞移植小鼠急性移植物抗宿主病的影響.pdf

1、目的： 研究不同濃度前列腺素E2(PGE2)對外周血T細(xì)胞增殖的影響，分析其對不同T細(xì)胞亞群特征性細(xì)胞因子干擾素-γ(IFN-γ)和白細(xì)胞介素-4(IL-4)產(chǎn)生的影響以及對Th1和Th2細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用。 探討PGE2對異基因造血干細(xì)胞移植(allo-HSCT)小鼠急性移植物抗宿主病(aGVHD)的影響。 方法： 不同濃度PGE2條件下，應(yīng)用抗CD3和抗CD28單克隆抗體(mAb)與健康成人外周血單個(gè)

2、核細(xì)胞(MNC)，RPMI 1640，10％胎牛血清(FBS)，于37℃、5％CO2飽和濕度下共同培養(yǎng)120h，加入5-溴脫氧尿嘧啶核苷(BrdU)，收集細(xì)胞測定細(xì)胞增殖程度，不加PGE2組為陽性對照組。PGE2濃度為14μmol/L條件下，應(yīng)用抗CD3和抗CD28mAb刺激健康成人外周血MNC，分別于24h、48h、72h和120h取細(xì)胞上清液，ELISA測定上清液中IFN-γ和IL-4濃度，不加PGE2組為對照組。PGE2濃度為14

3、μmol/L條件下，健康成人外周血MNC，培養(yǎng)20小時(shí)后加入佛波酯(PMA)50ng/ml、離子霉素1μg/ml和莫能霉素2μg/ml，培養(yǎng)4～6h后，測定CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞IL-4/IFN-γ生成情況，不加PGE2組為對照組。 雌性BALB/c(H-2d)小鼠接受致死量全身照射(TBI)后，經(jīng)小鼠尾靜脈注射C57BL/6(H-2b)雄性供鼠骨髓細(xì)胞和脾臟細(xì)胞。B實(shí)驗(yàn)組分別于0d，4d，8d，12d尾靜脈注射PGE2

4、，A實(shí)驗(yàn)組未用藥，觀察兩組小鼠造血恢復(fù)情況、aGVHD表現(xiàn)及生存時(shí)間，取皮膚、肝臟及小腸病理組織學(xué)檢查。 結(jié)果： 外周血T淋巴細(xì)胞在抗CD3mAb和抗CD28mAb的刺激下增殖，加入PGE2的濃度分別為7μmol/L、14 μmol/L和28μmol/L時(shí)，T細(xì)胞增殖的抑制率分別為(18.3429±15.8648)％、(54.3114±19.1912)％和(91.2057±4.5962)％，隨著PGE2的濃度增加，T細(xì)胞

5、增殖的抑制率明顯增加(P=0.001)；T細(xì)胞增殖抑制率與PEGE2濃度之間呈明顯的正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)=0.889，P=0.000)。 對照組細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IFN-γ濃度隨培養(yǎng)時(shí)間延長持續(xù)增高(P=0.046)，但實(shí)驗(yàn)組在培養(yǎng)120h的IFN-γ濃度與第72h的IFN-γ濃度相比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.917)；實(shí)驗(yàn)組和對照組細(xì)胞培養(yǎng)24h上清液的IFN-γ濃度分別為(537.63±440.65)pg/ml和(5215.4

6、7±6073.39)pg/ml(P=0.016)，培養(yǎng)48h上清液IFN-γ濃度分別為(6244.33±5578.32)pg/ml和(43046.00±31216.73)pg/ml(P=0.010)，培養(yǎng)72h細(xì)胞上清液IFN-γ濃度分別為(9592.87±7787.19)pg/ml和(69876.33±32381.93)pg/ml(P=0.004)，培養(yǎng)120h細(xì)胞上清液IFN-γ濃度分別為(10456.66±12077.94)pg/

7、ml和(88934.33±36166.85)pg/ml(P=0.004)，實(shí)驗(yàn)組在不同時(shí)間產(chǎn)生的IFN-γ濃度均明顯低于對照組。 實(shí)驗(yàn)組在不同時(shí)間產(chǎn)生IL-4濃度無明顯變化，24h、48h、72h和120h濃度分別為(21.80±6.84)pg/ml、(16.51±8.15)pg/ml、(11.85±9.99)pg/ml和(15.88±13.24)pg/ml(P=0.400)；對照組24h、48h、72h和120h細(xì)胞培養(yǎng)上清I

8、L-4濃度分別為(144.14±119.85)pg/ml、(36.83±21.30)pg/ml、(21.17±16.51)pg/ml和(14.82±12.89)pg/ml，對照組24h細(xì)胞培養(yǎng)上清IL-4濃度高于48h、72h和120h(P值分別為0.007、0.003和0.002)；實(shí)驗(yàn)組與對照組在同一時(shí)間對比顯示細(xì)胞培養(yǎng)24h時(shí)實(shí)驗(yàn)組IL-4濃度明顯低于對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.037)；培養(yǎng)48h、72h和120h，實(shí)驗(yàn)

9、組與對照組IL-4濃度比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.068、0.343和0.870)。 實(shí)驗(yàn)組與對照組CD4+IFN-γ+T細(xì)胞的比例分別為23.8l(16.16~48.73)％和24.04(12.03~50.77)％，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.767)；實(shí)驗(yàn)組與對照組CD4+IL-4+的T細(xì)胞比例分別為3.98(1.61~38.19)％和2.74(1.82~9.72)％，實(shí)驗(yàn)組略高于對照組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.051

10、)；實(shí)驗(yàn)組與對照組CD4+IL-4+T細(xì)胞與CD4+IFN-γ+T細(xì)胞的比值分別為0.21094(0.069~0.784)和0.13239(0.045~0.511)，實(shí)驗(yàn)組的比值明顯高于對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.011)。 實(shí)驗(yàn)組與對照組CD8+IFN-γ+T細(xì)胞的比例分別為44.48(22.52~60.68)％和39.02(20.63~62.93)％，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.441)；實(shí)驗(yàn)組與對照組CD8+IL-4

11、+T細(xì)胞的比例分別為19.04.(4.21～50.69)％和9.46(0.48～48.02)％，實(shí)驗(yàn)組明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.015)；實(shí)驗(yàn)組與對照組CD8+IL-4+T細(xì)胞與CD8+IFN-γ+T細(xì)胞的比值分別為0.42806(0.159～0.949)和0.27775(0.017～0.918)，實(shí)驗(yàn)組比值明顯高于對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.038)。 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，A實(shí)驗(yàn)組小鼠體重開始下降的中位時(shí)

12、間為移植后15(13～18)d，B實(shí)驗(yàn)組小鼠體重開始下降中位時(shí)間為移植后17.5(14～19)d，與A實(shí)驗(yàn)組相比較發(fā)生時(shí)間延遲，但區(qū)別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.096)。A實(shí)驗(yàn)組和B實(shí)驗(yàn)組小鼠死亡前或50d處死前的aGVHD臨床表現(xiàn)評分分別為(6.80±2.17)和(5.00±2.97)，區(qū)別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.247)。生存情況比較顯示兩組小鼠之間50d的生存率區(qū)別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.398)。 結(jié)論： PGE2在體外

13、抑制外周血T細(xì)胞的增殖，隨著PGE2濃度增加其對T細(xì)胞增殖的抑制率逐漸增強(qiáng)；PGE2影響T細(xì)胞產(chǎn)生Th1型和Th2型細(xì)胞因子，作用24h即可抑制IFN-γ的產(chǎn)生，并且顯著影響T細(xì)胞IFN-γ的產(chǎn)生高峰出現(xiàn)，對IFN-γ具有持續(xù)性的抑制作用；PGE2對T細(xì)胞產(chǎn)生IL-4的影響在24h出現(xiàn)，但是對IL-4的持續(xù)性影響并不明顯；PGE2使CD4+IL-4+T細(xì)胞與CD4+IFN-γ+T細(xì)胞的比值和CD8+IL-4+T細(xì)胞與CD8+IFN-γ+