人體血管瘤動(dòng)物模型的生物學(xué)特性及其凋亡的初步研究.pdf

1、目的：血管瘤是小兒最常見的以血管內(nèi)皮細(xì)胞增生為特點(diǎn)的良性腫瘤，其臨床特點(diǎn)為相當(dāng)多數(shù)血管瘤會在一定時(shí)間內(nèi)自行消退，患兒在10～12歲之前其血管瘤消退率可達(dá)到90％。近年通過病理觀察、組織化學(xué)、細(xì)胞培養(yǎng)、超微結(jié)構(gòu)等研究，對其自然消退機(jī)理進(jìn)行探討，越來越多的認(rèn)為增殖和凋亡的平衡失調(diào)是血管瘤發(fā)展過程中的重要現(xiàn)象，兩者平衡改變導(dǎo)致血管瘤的增生、靜止、消退三個(gè)時(shí)期的出現(xiàn)。但是目前對人體血管瘤增殖凋亡的知識主要是來自處于不同發(fā)展階段的部分臨床不同個(gè)體

2、病例中取得的組織標(biāo)本所做的檢測，而缺乏對單一個(gè)體腫瘤組織來源的細(xì)胞增殖凋亡規(guī)律以及各項(xiàng)生物學(xué)特性動(dòng)態(tài)變化的了解。本研究通過將增殖期人血管瘤組織移植于免疫缺陷的裸小鼠皮下，建立同一組織來源的血管瘤移植動(dòng)物模型(前期實(shí)驗(yàn)已經(jīng)成功建立)，動(dòng)態(tài)觀察移植的人血管瘤在活體內(nèi)的生長、消退特性，研究同一組織來源的血管瘤瘤在人體中的內(nèi)皮細(xì)胞增殖和凋亡狀況，及血管瘤發(fā)展過程中生物學(xué)特性的變化，從而初步探討血管瘤自然消退的原因及規(guī)律。 方法：動(dòng)物模型

3、的建立：將手術(shù)切除的增殖期人血管瘤組織皮下部分切分為5mm×4mm×3mm小塊，分別植入16只BALB/Cnu/nu幼年裸小鼠皮下幾處；裸小鼠雌雄不拘。 移植瘤生長的動(dòng)態(tài)觀察及測量：每周定期觀察移植瘤生長情況。于移植后第2天、5天、7天、15天、30天、45天、60天、90天、120天、180天用游標(biāo)卡尺測量腫瘤最大直徑a及橫徑b，根據(jù)公式V=π/6×a×b2估算腫瘤體積變化。 各時(shí)期移植瘤鏡下觀察：分別于移植后2天、5

4、天、7天、15天、30天、45天、60天、90天、120天、180天隨機(jī)切取三個(gè)標(biāo)本后包埋做成石蠟切塊，HE染色光鏡下觀察其組織學(xué)特點(diǎn)、血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖情況及血管壁結(jié)構(gòu)完整性。將各個(gè)時(shí)期的組織分別做cd31的免疫組化觀察，證明移植瘤體細(xì)胞確系來源于原人體血管瘤的細(xì)胞。 TUNEL凋亡指數(shù)、Ki-67的測定，對模型中瘤體增殖凋亡進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察 VEGF、GR的免疫組化在瘤體生長過程中的動(dòng)態(tài)觀察各指標(biāo)數(shù)據(jù)等結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析

5、 結(jié)論：將增殖期人血管瘤組織移植于免疫缺陷的裸小鼠體內(nèi)，可建成異種移植人血管瘤在體動(dòng)物模型。移植瘤大部分存活并生長，在度過缺血期移植瘤異體生長穩(wěn)定后，表現(xiàn)快速增殖，繼而自發(fā)出現(xiàn)緩慢消退。整個(gè)觀察過程中移植瘤內(nèi)的內(nèi)皮細(xì)胞主要為人內(nèi)皮細(xì)胞，移植瘤在宿主體內(nèi)保持了相對獨(dú)立性。該模型很好地模擬了人血管瘤早期快速增殖而后自行緩慢消退的自然過程，為本實(shí)驗(yàn)觀察同一瘤體的自然發(fā)展過程和其生物學(xué)特性的研究提供了一個(gè)較為理想的研究平臺。 細(xì)胞的增殖

6、、分化和凋亡即受細(xì)胞外信號的調(diào)控，又依靠細(xì)胞內(nèi)的級連反應(yīng)進(jìn)行調(diào)控，使細(xì)胞增殖、分化或凋亡有序的進(jìn)行，若這種精細(xì)調(diào)節(jié)程序改變則可能發(fā)生疾病，而血管瘤即和血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞增殖凋亡的不平衡有關(guān)。本研究中資料顯示在移植血管瘤發(fā)展的各個(gè)階段都存在內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和凋亡現(xiàn)象，但在整個(gè)演變過程中凋亡指數(shù)變化于18.02到82.97之間，而增殖指數(shù)變化于21.25到48.23之間，血管瘤細(xì)胞凋亡的變化幅度遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于其增殖情況。所以根據(jù)本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果可以推測，增

7、值和凋亡的共同影響在人體血管瘤的消退中發(fā)生了重要的作用，而凋亡在血管瘤的演變過程中占主導(dǎo)作用，在增生期，血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡活性低，表現(xiàn)為血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖；在退化期，血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡活躍，遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，此時(shí)血管內(nèi)皮細(xì)胞表現(xiàn)為凋亡，從而發(fā)生血管瘤的自然消退。 血管新生過程開始后，血管內(nèi)皮細(xì)胞與其他支持細(xì)胞的連接松解，為細(xì)胞的增殖和遷移做好準(zhǔn)備；但這種狀態(tài)下的細(xì)胞十分容易發(fā)生凋亡，只有周圍存在高濃度的VEGF才能使細(xì)