腦梗死肝陽化風證患者外周血單個核細胞蛋白質組學研究.pdf

1、研究目的： 1.建立腦梗死肝陽化風證、陰虛風動證高分辨率的二維凝膠電泳圖譜； 2.應用比較蛋白質組學方法分析并鑒定腦梗死肝陽化風證和陰虛風動證的相關蛋白質； 3.從腺苷酰環(huán)化酶(adenylate cyclase，AC)在腦梗死肝陽化風證及陰虛風動證中的基因表達，探討中醫(yī)肝陽化風證與陰虛風動證的關聯(lián)性與差異性。 研究方法：設腦梗死肝陽化風證組、健康人對照組、腦梗死陰虛風動證對照組3組，嚴格按照疾病診斷、證

2、侯診斷標準，選擇腦梗死肝陽化風證患者15例，腦梗死陰虛風動證患者15例，按照納入排除標準，選擇健康人15例，取外周靜脈血分離單個核細胞提取蛋白質，經雙向凝膠電泳，考馬斯亮藍染色獲取凝膠圖譜，PDQuest V7.3.1軟件比較分析3組圖譜并識別腦梗死肝陽化風證與陰虛風動證的差異表達蛋白質點及相同表達蛋白質點。MALDI-TOF-MS質譜儀進行肽質量指紋譜的鑒定，Mascot檢索軟件檢索軟件在Swiss-prot數(shù)據(jù)庫搜索進行蛋白鑒定，檢

3、索出相關蛋白質的名稱、分類及功能。并用RT-PCR技術檢測腺苷酰環(huán)化酶(adenylate cyclase，AC)在腦梗死肝陽化風證及陰虛風動證中的基因表達情況。 研究結果： 1.初步建立了腦梗死肝陽化風證、健康人組、腦梗死陰虛風動證患者外周血單個核細胞2-DE圖譜，分別獲得蛋白質點459個，552個，644個； 2.PDQuest V7.3.1軟件比較分析，發(fā)現(xiàn)了腦梗死肝陽化風證與陰虛風動證的相同蛋白質點8個，

4、差異蛋白質點23個； 3.MALDI-TOF-MS質譜分析和MASCOT軟件檢索Swissprot蛋白質數(shù)據(jù)庫鑒定出27個蛋白質斑點，共20種蛋白質，各種蛋白質點在3組的表達各異，經肝陽化風組與健康對照組，陰虛風動組與健康對照組，以及肝陽化風組與陰虛風動組的相互比較，發(fā)現(xiàn)肝陽化風組與陰虛風動組差異蛋白質點23個，鑒定出22個共15種蛋白質，分別為成帽蛋白、血小板凝血酶敏感蛋白-1、腺苷酰環(huán)化酶聯(lián)合蛋白-1、鳥苷二磷酸解離抑制因子

5、2、γ-肌動蛋白、鈣結合蛋白、肌球蛋白調節(jié)輕鏈、抗增殖蛋白、谷胱甘肽轉移酶ω-1、硫氧還蛋白過氧(化)物酶-1、Visual cortex cDNA、假想蛋白、Ras抑制蛋白、受體相關蛋白/RNA聚合酶相關蛋白、鋅結合蛋白；相同表達蛋白質點8個，鑒定出6個蛋白質點共5種蛋白質.分別為核內不均一核糖核蛋白、絲氨酸/蘇氨酸特異蛋白激酶、踝蛋白、纖維蛋白素原β-鏈前體、纖維蛋白素原α鏈前體，包括細胞骨架蛋白，信號傳導蛋白，氧化還原蛋白，凋亡相

6、關蛋白，血液蛋白等多類蛋白質表達異常； 4.腺苷酰環(huán)化酶(adenylate cyclase，AC)mRNA在腦梗死肝陽化風組中表達缺失，陰虛風動組中表達明顯下調，且表達量有顯著差異性(P<0.05)。 研究結論： 1.初步建立了腦梗死肝陽化風證、腦梗死陰虛風動證及健康人PBMC2-DE圖譜，并通過MODI-TOP-MS技術鑒定分析出腦梗死肝陽化風證與陰虛風動證相同表達蛋白與差異表達蛋白，提示本病相類證有共同的物