Caspase-3抑制劑z-DEVD-fmk治療兔外傷性視神經(jīng)損傷的實驗研究.pdf

1、目的: (1)應用FPI建立標準化兔外傷性視神經(jīng)損傷動物模型，并探討該模型的穩(wěn)定性。 (2)量化評價特異性caspase-3抑制劑z-DEVD-fmk治療外傷性視神經(jīng)損傷的療效，并分析相關(guān)影響因素。 (3)探討caspase-3抑制劑z-DEVD-fmk對兔外傷性視神經(jīng)損傷后視功能的保護作用，為臨床上外傷性視神經(jīng)損傷的治療提供新的思路。 方法: 中國純種大耳白兔148只，從中隨機選取4只兔(8只眼

2、)作為空白對照組(N組)，其余144只(288只眼)為實驗組，實驗組根據(jù)給藥劑量不同隨機分為低劑量組(L組，1.5μg/kg，48只)、中劑量組(M組，2.5μg/kg，48只)和高劑量組(H組，3.5μg/kg，48只)，各組根據(jù)治療后不同觀察時間，分為1、4、7、10、14和21d亞組，每組8只(16只眼)。實驗組采取自身對照法，雙眼均建立外傷性視神經(jīng)損傷動物模型，右眼為治療眼，左眼為對照眼。應用液壓沖擊顱腦損傷儀(FPI)建立標準

3、化兔外傷性視神經(jīng)損傷動物模型。實驗組中治療眼于損傷后30min玻璃體腔注射caspase-3抑制劑z-DEVD-fmk，對照眼注射相同體積2％二甲基亞砜。所有眼均在相應觀察點行閃光視覺誘發(fā)電位檢查、HE染色、視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞計數(shù)以及Western印跡分析檢測caspase-3蛋白表達量。 結(jié)果: (1)caspase-3的表達：z-DEVD-fmk可有效抑制視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜組織caspase-3表達和活化，治療眼和對照

4、眼的兔視網(wǎng)膜組織均可檢測到caspase-3的前體(32kDa)及其切割片段(12kDa)的特異性條帶。治療眼視網(wǎng)膜caspase-3前體及其切割片段呈低水平表達，對照眼caspase-3及其切割片段均呈高水平表達。無論是否治療，均未出現(xiàn)顯著的caspase-3前體及其切割片段表達量的時序關(guān)系。 (2)視網(wǎng)膜病理：空白對照組兔視網(wǎng)膜各層細胞排列整齊致密。實驗組傷后1天視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞層(Ganglion Cells Layer，

5、GCL)內(nèi)可見毛細血管破裂出血，傷后21天GCL內(nèi)散在核染色質(zhì)濃集、邊聚的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞(RetinalGanglion Cells，RGCs)，可見空化的RGCs，視網(wǎng)膜各層細胞數(shù)量明顯減少，視網(wǎng)膜總厚度變薄。RGCs計數(shù)顯示3個劑量組均隨著給藥時間的延長，RGCs計數(shù)比值逐步增高，其中中、高劑量組具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，低劑量組無統(tǒng)計學差異(P=0.299)。治療后1、4、7天，不同劑量組間無統(tǒng)計學差別(P>0.05)，1

6、0天后可見到差異，其中低劑量組RGCs計數(shù)比明顯低于中、高劑量組(P<0.05)，中、高劑量組間無統(tǒng)計學差異。 (3)F-VEP：正常白兔可引出穩(wěn)定的N-P100-N波形，潛伏期和振幅分別為42.72+/-2.74ms和8.79+/-2.12μv。傷后1天中劑量組對照眼主波P100潛伏期延長為86.90+/-7.71ms，振幅降低為5.29+/.1.06μv，與空白對照組相比具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。治療后1天及4天3個劑

7、量組的實驗眼表現(xiàn)為與對照眼相同的惡化趨勢，而第7天起實驗眼的潛伏期和振幅均開始恢復。3個劑量組均顯示隨觀察時間延長，潛伏期比值逐漸降低(P<0.01)，振幅比值逐漸增高(P<0.01)，即視功能的逐漸恢復。 結(jié)論: (1)應用FPI能夠建立穩(wěn)定的可量化的兔外傷性視神經(jīng)損傷動物模型。 (2)caspase-3抑制劑z-DEVD—fmk通過阻斷caspase-3的作用而有效抑制RGCs凋亡，達到了視神經(jīng)保護的作用。