外傷性視神經病變模型建立及干預修復研究.pdf

1、本文對外傷性視神經病變模型建立及干預修復進行了研究。本研究分為三個部分：
　　 第一部分：應用FPI建立兔外傷性視神經病變動物模型。
　　 目的：應用液壓沖擊顱腦損傷儀建立兔外傷性視神經病變動物模型。
　　 方法：應用液壓沖擊顱腦損傷儀(FPI)建立兔外傷性視神經病變模型。將兔分為正常對照組和損傷后1d、7d、14d、28d亞組，每組各8只。觀察損傷后不同時間點視覺誘發(fā)電位及視網膜形態(tài)學變化。
　　 結果

2、：⑴對照組視網膜及脈絡膜結構良好，層次清晰，RGC呈單層排列，整齊密集，胞核清楚，核膜光滑完整;視神經損傷后視網膜各層結構變薄，細胞數量逐漸減少，RGCs出現核固縮，染色加深，排列稀疏，逐漸出現空化RGCs。⑵正常對照組視覺誘發(fā)電位檢查均引出典型的N75-P100-N135曲線，潛伏期和振幅分別為(41.63±4.89) ms和(9.12±2.97)μv;視神經損傷后1dP100波潛伏期延長，波幅降低，與對照組相比有統(tǒng)計學意義(P＜0.

3、05)，傷后潛伏期逐步延長，波幅降低。
　　 結論：應用FPI成功建立兔外傷性視神經病變動物模型，為外傷性視神經病變發(fā)病機制的相關研究奠定良好基礎。
　　 第二部分：晶狀體損傷促進兔外傷性視神經病變RGCs軸突再生作用及機制。
　　 目的：探討晶狀體損傷促進外傷性視神經病變RGCs軸突再生的作用及機制。
　　 方法：選取128只中國白兔作為實驗動物，隨機分為實驗組和對照組，每組各64只，每組按照不同觀察時

4、間點(1、2、4、7、10、14、21、28d)分為8個亞組。每亞組8只。應用FPI建立右眼外傷性視神經病變模型，實驗組損傷右眼晶狀體，對照組不損傷右眼晶狀體。于損傷前及損傷后1、2、4、7、10、14、21、28 d行F-VEP檢查并進行比較，并于上述各時間點制作視網膜切片，采用免疫組織化學法檢測視網膜中巨噬細胞的數量，用焦油紫染色標記存活的視網膜神經節(jié)細胞(RGCs)，對存活的RGCs進行計數。
　　 結果：實驗組，視神經損

5、傷后1天，F-VEP主波P100潛伏期延長，振幅降低，10天時潛伏期最長，隨后潛伏期逐漸縮短，振幅7天時最低，隨后振幅逐漸升高;在對照組，視神經損傷后P100潛伏期逐漸延長，振幅逐漸降低。在實驗組，鐵染色標記陽性的活化巨噬細胞在在視神經損傷后4天視網膜內檢測到，軸突再生的RGCs損傷后7天檢測;而在對照組，始終沒有檢測到鐵染色標記陽性的活化巨噬細胞和軸突再生的RGCs。
　　 結論：晶狀體損傷可促進外傷性視神經病變RGCs軸突再

6、生，活化的巨噬細胞在其中起著重要作用。
　　 第三部分：Z-DEVD-FMK對兔外傷性視神經病變RGCs的保護作用。
　　 目的：觀察Z-DEVD-FMK對免外傷性視神經病變視網膜神經節(jié)細胞的保護作用。
　　 方法：健康中國白兔104只，隨機選取8只兔作為空白對照組(N組），其余96只作為實驗組，分為玻璃體腔注射組和眼周注射組，每組48只。玻璃體腔注射組中兔右眼注射Z-DEVD-FMK(A組)，左眼注射DMSO液

7、（B組）。眼周注射組中免右眼注射Z-DEVD-FMK（C組），左眼注射DMSO液（D組）。每組又根據給藥后1d、4d、7d、10d、14d、21d觀察時間點分為六個亞組，每個亞組8只眼。應用液壓沖擊顱腦損傷儀(fluid percussion brain injury device，FPI)建立兔外傷性視神經病變動物模型，分別于損傷后第1d、4d、7d、10d、14d、21d行F-VEP檢查，TUNEL法檢測RGCs凋亡。
　　

8、 結果：⑴F-VEP:給藥后第7d、第10d、第14d和第21d，A組和C組的P100潛伏期逐漸縮短，振幅逐漸升高。與B組和D組相比均具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。A組和C組主波潛伏期在給藥后第4d雖然仍在延長，但與B組和D組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，A組傷后第21天的潛伏期和振幅分別為(64.46±5.92)ms和(6.61±2.61)μv，C組分別為(71.06±5.57)ms和(5.91±1.64)μv，兩組比較差異

9、有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)?？瞻讓φ战M潛伏期和振幅與其他各組相應時間點比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。⑵TUNEL染色及RGCs凋亡率:C組和D組在傷后第1天TUNEL染色可見凋亡細胞，第4天明顯增多，至第7天達高峰。A組和C組在傷后第4天至第10天僅可見少量凋亡細胞，在第4天-第21天，與B組、D組比較，RGCs凋亡率明顯減少。
　　 結論：Caspase-3抑制劑Z-DEVD-FMK能有效地抑制視神經損傷后神經節(jié)