類風濕關(guān)節(jié)炎與TLR信號傳導通路基因多態(tài)性的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、第一部分、髓樣分化因子88(Myd88)與腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(TRAF6)外顯子編碼區(qū)突變位點篩選
　　背景:類風濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis RA)是以慢性對稱性多關(guān)節(jié)損害為主要表現(xiàn)的一種全身性自身免疫性疾病，病因與發(fā)病機制目前尚未闡明。隨著免疫遺傳學的發(fā)展，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，固有免疫在RA發(fā)病和病情進展中具有重要作用，TOLL樣受體（Toll-like receptor TLR）信號傳導通路是介

2、導固有免疫的經(jīng)典通路，近年來TLR信號傳導通路與自身免疫性疾病的研究成為熱點。TLR信號傳導通路包括髓樣分化因子88(myeloid differentiation factor88 MyD88)依賴性途徑和MyD88非依賴性途徑。MyD88依賴途徑是大部分TLR信號傳導通路共用途徑，MyD88、TRAF6(tumor necrosis factor receptor2 associated factors，TRAF6)是該通路中重要的

3、接頭蛋白。對RA患者MyD88、TRAF6基因突變位點篩選可能從遺傳學角度了解固有免疫在RA發(fā)病機制中的作用。
　　目的:對RA患者MyD88、TRAF6外顯子編碼區(qū)區(qū)域基因測序，試圖發(fā)現(xiàn)RA患者該區(qū)域的突變位點，以便進一步探索Toll樣受體信號傳導通路中MyD88、TRAF6基因多態(tài)性與RA的關(guān)聯(lián)。
　　方法:
　　1.選取30例RA患者全血標本，提取DNA。
　　2.應用聚合酶鏈反應(PCR)擴增DNA片段，

4、并鑒定、純化其產(chǎn)物。
　　3.利用測序儀分別對MyD88、TRAF6基因外顯子5個編碼區(qū)進行測序，試圖發(fā)現(xiàn)新的突變位點。
　　結(jié)果:30例RA患者DNA標本MyD88、TRAF6基因外顯子5個編碼區(qū)基因序列與基因庫已知序列完全一致。
　　結(jié)論:未發(fā)現(xiàn)RA患者MyD88、TRAF6基因外顯子編碼區(qū)新的突變位點。
　　第二部分、類風濕關(guān)節(jié)炎與Toll樣受體信號傳導通路中MyD88基因多態(tài)性關(guān)聯(lián)的研究
　　背景:

5、研究顯示天然免疫在RA發(fā)病和病情進展中起重要作用，而Toll-like receptors(TLRs)與RA病情進展的關(guān)系成為近年來研究熱點。MyD88是TLR家族成員信號通路必要的轉(zhuǎn)接分子，介導上游信號向下游傳導，參與TNF-α、IL-1、IL-6等炎性因子激活，因此，了解MyD88及其下游炎性因子的基因多態(tài)性與RA的相關(guān)性，有助于明確RA的病因與發(fā)病機制。
　　方法:
　　1.選取162例RA患者和188例正常對照的全血

6、標本，搜集RA患者RF-IgA、RF-IgG、RF-IgM、CCP、RA33、GPI抗體數(shù)據(jù)。
　　2.提取DNA，對SNP位點rs7744基因分型。
　　3.統(tǒng)計學分析病例組與對照組之間的基因型頻率、等位基因頻率。
　　4.統(tǒng)計學分析RA患者基因型頻率、等位基因頻率與各臨床表型之間的關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　1.MyD88位點rs7744病例組與對照組的三種基因型頻率AA、AG、GG無統(tǒng)計學差異(P＞0.0

7、5)，A/G等位基因頻率差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　2.GPI陽性的RA患者AG基因型比例高于GPI陰性RA患者，其比例分別為57.7％、35.3％(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.RA患者rs7744的基因型頻率、等位基因型頻率無性別差異。
　　2(。)rs7744的基因型頻率、等位基因型頻率在RF-IgA、RF-IgG、RF-IgM、CCP、RA33呈陽性的RA患者與陰性患者間均無統(tǒng)計學差異

8、。
　　3.GPI陽性的RA患者出現(xiàn)AG雜合基因型的比例較高，提示rs7744位點雜合基因型AG可能與RA抗體GPI關(guān)聯(lián)。
　　第三部分、類風濕關(guān)節(jié)炎與Toll樣受體信號傳導通路中TRAF6基因多態(tài)性關(guān)聯(lián)的研究
　　背景:類風濕關(guān)節(jié)炎是一種多因子病，遺傳因素與環(huán)境因素在這一過程中發(fā)揮著重要作用，Toll樣受體(TLR)/IL-1R信號傳導途徑的活化與類風濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生與發(fā)展明顯相關(guān)。在此信號傳導通路中，TRAF6的激

9、活可以促進炎性因子的表達，從而導致類風濕關(guān)節(jié)炎病情的不斷惡化進展，本實驗通過探討TRAF6基因突變與RA的關(guān)聯(lián)，試圖進一步明確兩者之間的相關(guān)性。
　　方法:
　　1.選取162例RA患者和188例正常對照的全血標本，搜集RA患者RF IgA、RF-IgG、RF-IgM、CCP、RA33、GPI抗體數(shù)據(jù)。
　　2.提取DNA，對SNP位點rs030445基因分型。
　　3.統(tǒng)計學分析病例組與對照組之間的基因型頻率、

10、等位基因頻率。
　　4.統(tǒng)計學分析RA患者基因型頻率、等位基因頻率與各臨床表型之間的關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　1.TRAF6 SNP位點rs5030445病例組與對照組的三種基因型頻率AA、AG、GG無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)，A/G等位基因頻率差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　2.RA的7個臨床表型中，性別、RF-IgG、RF-IgM、CCP、RA33、GPI與rs5030445基因型頻率、等位基因型頻率

11、均為無統(tǒng)計學差異。RF-IgA陽性RA患者A等位基因頻率明顯高于RF-IgA陰性RA患者，比例分別為14.6％、6.8％(P＜0.05)。
　　結(jié)論:TRAF6rs5030445位點攜帶A等位基因的患者出現(xiàn)RF-IgA陽性的幾率可能較高，A等位基因可能為RA的易感基因。
　　第四部分、類風濕關(guān)節(jié)炎與白介素家族(IL-1RAP、IL-6、IL-6R)基因多態(tài)性關(guān)聯(lián)的研究
　　背景:類風濕關(guān)節(jié)炎是遺傳因素和環(huán)境因素共同作用

12、的結(jié)果，易感基因與RA的關(guān)系密不可分。IL-1在類風濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病的過程中不僅參與血管翳與滑膜炎癥的形成，而且對骨與軟骨的破壞起重要作用。IL-6是一種前炎癥因子，能夠誘導IFN-γ和腫瘤壞死因子α及各種趨化因子的表達，與RA的發(fā)病關(guān)系密切。通過研究IL-1RAP、IL-6、IL-6R基因多態(tài)性與類風濕關(guān)節(jié)炎的關(guān)聯(lián)，從遺傳學角度進一步探討IL-1RAP、IL-6、IL-6R在RA發(fā)病機制中的作用。
　　方法:
　　1.選取16

13、2例RA患者和188例正常對照的全血標本。
　　2.提取DNA，對IL-1RAP、IL-6、IL-6R SNP位點rs766442(IL-1RAP)、rs6946864(IL-6)、rs11265618(IL-6R)、rs4845626（IL-6R）基因分型。
　　3.統(tǒng)計學分析病例組與對照組之間的基因型頻率、等位基因頻率。
　　4.統(tǒng)計學分析RA患者基因型頻率、等位基因頻率與各臨床表型之間的關(guān)系。
　　結(jié)果:<

14、br>　　1.RA組IL-1RAPrs766442基因型頻率、等位基因頻率與正常對照組之間差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。RF-1gG陽性的RA患者TT基因型比例(84.8％)高于RF-IgG陰性的RA患者(70.3％)，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　2.RA組IL-6 SNP位點rs6946864基因型頻率、等位基因頻率與正常對照組之間無統(tǒng)計學差異。
　　3.RA組IL-6R的SNP位點rs4845626

15、基因型頻率、等位基因頻率與正常對照組之間無統(tǒng)計學差異。IL-6R的SNP位點rs11265618基因型頻率與正常對照組之間無統(tǒng)計學差異。RA組C/T等位基因頻率0.928/0.108，正常對照組等位基因頻率0.941/0.059，兩組問差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.IL-1RAPrs766442的TT基因型可能與RA關(guān)聯(lián)，攜帶T等位基因的RA患者RF-IgG陽性的幾率可能較高。
　　2.IL