FTO與FoxO1在非酒精性脂肪肝中的表達(dá)及其意義.pdf

1、背景：
　　非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)是遺傳-環(huán)境-代謝應(yīng)激相關(guān)性疾病，與肥胖密切相關(guān)。FTO(fat mass and obesity associated)基因是Frayling發(fā)現(xiàn)的肥胖新基因。FTO在NAFLD中表達(dá)上調(diào)，促進(jìn)肝臟細(xì)胞內(nèi)的成脂及氧化應(yīng)激。在肝臟發(fā)生胰島素抵抗時(shí)，叉頭轉(zhuǎn)錄因子O1(Forkhead Box O1，F(xiàn)oxO1)的活性增加，引起糖

2、脂代謝紊亂。然而，F(xiàn)TO與FoxO1在非酒精性脂肪肝發(fā)病過程中的關(guān)系及作用機(jī)制尚未完全闡明。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察FTO與FoxO1在非酒精性脂肪肝小鼠模型肝臟中的表達(dá)水平及組織學(xué)定位，及肝細(xì)胞脂肪變性模型中FTOmRNA、FoxO1mRNA的表達(dá)水平，并初步探討其可能的機(jī)制，期望為NAFLD的防治提供新的思路。
　　目的：
　　(1)觀察非酒精性脂肪肝小鼠模型中FTO、FoxO1及AMPK的組織學(xué)定位及表達(dá)水平，并分析三者之間的相

3、關(guān)性進(jìn)一步探討NAFLD發(fā)病的分子機(jī)制。
　　(2)探討FTO與FoxO1在高脂誘導(dǎo)的人肝臟細(xì)胞中的表達(dá)水平，探討二者在非酒精性脂肪肝中的作用機(jī)制。
　　方法：
　　(1)用高能高脂飼料制備非酒精性脂肪肝小鼠動物模型，測肝指數(shù);全自動生化儀檢測AST、ALT、TG、TC、ALP、HDL、LDL;HE染色進(jìn)行小鼠肝臟病理檢測;用免疫組織化學(xué)方法檢測FTO、FoxO1蛋白，AMPK的表達(dá)及組織學(xué)定位;
　　(2)用含

4、50％胎牛血清的培養(yǎng)基誘導(dǎo)人L02肝細(xì)胞脂肪變性模型，正常對照組用含10％胎牛血清的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，兩組分別培養(yǎng)24h、48h、72h;油紅O染色觀察細(xì)胞內(nèi)脂滴;全自動生化儀檢測細(xì)胞上清肝酶及細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量;RT-PCR檢測不同時(shí)間點(diǎn)各組肝細(xì)胞內(nèi)FTOmRNA、FoxO1mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　(1)模型組小鼠與正常組小鼠在喂養(yǎng)10周末相比肝重、體重及肝指數(shù)明顯升高(P＜0.05)ALP、ALT、AST、LDL顯

5、著升高(P＜0.01)TC、TG亦明顯增高(P＜0.05)HDL明顯降低(P＜0.05);HE染色結(jié)果顯示模型組肝小葉內(nèi)出現(xiàn)大量脂肪變性，正常組肝小葉內(nèi)無脂肪變性;正常組FTO蛋白及FoxO1蛋白呈低分化表達(dá)，模型組FTO蛋白及FoxO1蛋白表達(dá)顯著增高(P＜0.01)且二者的表達(dá)具有相關(guān)性，AMPK在模型組小鼠表達(dá)下調(diào)，AMPK與FoxO1尚不存在線性相關(guān)，F(xiàn)TO與AMPK之間存在相關(guān)性。
　　(2)油紅O染色結(jié)果顯示含50％胎

6、牛血清的培養(yǎng)基24h、48h、72h均能成功誘導(dǎo)肝細(xì)胞脂肪變性模型，在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)模型組肝酶及TG含量均高于正常對照組且隨著時(shí)間延長含量增加;模型組FTOmRNA、FoxO1mRNA表達(dá)較對照組顯著增高(P＜0.01)模型組三個(gè)時(shí)間點(diǎn)FTOmRNA、FoxO1mRNA在48h表達(dá)水平最高(P＜0.05)，在24h、72h表達(dá)差異不明顯(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　高脂能引起小鼠肝臟中FTO表達(dá)上調(diào)，F(xiàn)oxO1去磷酸化水平