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文檔簡介
1、第一部分 JAZF1抵抗老齡化誘導的NAFLD的形成
目的:探討JAZF1基因過表達在老齡化誘導的NAFLD形成中的作用。
方法:15只8周齡的JAZF1轉(zhuǎn)基因小鼠( JAZF1-Tg鼠)和15只同年齡匹配的C57BL/6J小鼠(WT鼠)普食喂養(yǎng)3個時間段(3個月,6個月,12個月),每個時間點隨機抽取JAZF1-Tg和WT鼠各5只,檢測隨著年齡的增長各組小鼠的基礎(chǔ)生理代謝指標以及肝臟中涉及脂肪酸從頭合成和氧化相關(guān)基
2、因的mRNA及蛋白水平。
結(jié)果:隨著年齡的增長,WT鼠肝細胞內(nèi)甘油三酯累積明顯增多(P<0.05);與同齡的WT鼠比較,JAZF1-Tg鼠肝細胞內(nèi)甘油三酯含量明顯減少(P<0.05);與同齡的WT鼠比較,喂養(yǎng)12個月后的JAZF1-Tg鼠血TG、TC含量明顯減少(P<0.05);基因mRNA水平檢測顯示,與同齡WT鼠比較,喂養(yǎng)6個月和12個月后的JAZF1-Tg鼠肝臟中脂肪酸從頭合成相關(guān)基因(SREBP-1c,SCD-1,F(xiàn)A
3、S,ACC-1)表達明顯下調(diào)(P<0.05),而與脂肪酸氧化相關(guān)的基因((PPAR-α,CPT-1)表達變化不明顯(p>0.05);隨著年齡的增長,JAZF1基因的mRNA和蛋白水平表達明顯下調(diào)(P<0.05),而SREBP-1c基因的mRNA和蛋白水平表達明顯上調(diào)(P<0.05)。
結(jié)論:隨著年齡的增長,肝臟中JAZF1基因表達下調(diào), JAZF1過表達可抵抗老齡化誘導的NAFLD的形成。
第二部分 JAZF1改善高
4、脂喂養(yǎng)誘導的NAFLD的形成與發(fā)展
目的:探討JAZF1在高脂喂養(yǎng)誘導的NAFLD的形成與發(fā)展中的作用及相關(guān)分子機制。
方法:30只8周齡的JAZF1-Tg鼠和30只WT鼠分別隨機分為2組:普食喂養(yǎng)組(n=15)和高脂喂養(yǎng)組(n=15),各組小鼠喂養(yǎng)3個時間段(3個月,6個月,12個月),每個時間點隨機抽取高脂和普食喂養(yǎng)的JAZF1-Tg和WT鼠各5只。檢測各時間段小鼠的基礎(chǔ)生理代謝指標以及肝臟中涉及脂肪酸從頭合成與
5、氧化相關(guān)基因的mRNA及蛋白水平。分析每個喂養(yǎng)階段小鼠肝臟中AMPK/ACC信號變化情況。
結(jié)果:HE染色結(jié)果顯示,隨著喂養(yǎng)時間的延長,高脂喂養(yǎng)的WT鼠肝臟中脂肪變性程度逐漸加重,由最初少量肉眼可見的脂滴沉積,到彌漫性的脂肪變性,甚至高脂12個月的時候出現(xiàn)了大泡性脂肪變性以及炎癥細胞的浸潤。但是,與同階段高脂喂養(yǎng)WT鼠比較,JAZF1-Tg鼠的基礎(chǔ)代謝指標和肝臟中的TG,TC含量,以及組織學HE染色和油紅O染色結(jié)果均明顯改善。
6、基因檢測顯示,與同階段喂養(yǎng)的高脂WT鼠比較, JAZF1-Tg鼠肝臟中脂肪從頭合成相關(guān)基因的mRNA(SREBP-1c,SCD-1,F(xiàn)AS,ACC-1)明顯下調(diào),相關(guān)蛋白SREBP-1和FAS表達也呈現(xiàn)明顯下調(diào)(P<0.05),而與脂肪酸氧化相關(guān)基因的mRNA(PPAR-α,CPT-1)表達變化不明顯(p>0.05);且在高脂喂養(yǎng)3個月和6個月時,與WT鼠比較,JAZF1-Tg鼠肝臟AMPK信號檢測顯示, AMPK及其下游靶蛋白ACC的
7、磷酸化均明顯增加(P<0.05)。
結(jié)論: JAZF1過表達主要通過減少脂肪的從頭合成,改善高脂喂養(yǎng)誘導的NAFLD的形成與發(fā)展。
第三部分 JAZF1減少脂肪酸誘導的肝細胞內(nèi)脂質(zhì)累積及相關(guān)機制研究
目的:探討JAZF1在脂肪酸誘導的肝細胞脂肪變性中的作用及相關(guān)分子機制。
方法:在小鼠的原代肝細胞(PMH細胞)以及人HepG2肝癌細胞中,利用1mM的FFAs(OA:PA=2:1的比例)誘導肝脂肪變
8、性細胞模型,同時,利用JAZF1過表達病毒(Ad-JAZF1)和JAZF1的抑制病毒(shJAZF1)分別過表達和抑制JAZF1的表達,探討JAZF1基因在FFAs誘導的肝細胞脂質(zhì)累積中的作用,檢測脂肪酸從頭合成相關(guān)基因(SREBP-1c,SCD-1,F(xiàn)AS,ACC-1)的mRNA及相關(guān)蛋白的表達,分析肝細胞中AMPK/ACC信號變化情況。同時,構(gòu)建SREBP-1c基因啟動子,雙熒光素酶報告基因分析JAZF1基因?qū)REBP-1c基因啟
9、動子的調(diào)控作用。
結(jié)果:在小鼠的PMH和人HepG2肝癌細胞中,均成功誘導了肝脂肪變性細胞模型。在兩種肝脂肪變性細胞中,JAZF1過表達減少FFAs誘導的 PMH和 HepG2細胞內(nèi)脂滴的累積,與 Ad-GFP組比較, Ad-JAZF1組在FFAs誘導的脂肪變性肝細胞中脂肪酸從頭合成基因的mRNA(SREBP-1c,SCD-1,F(xiàn)AS,ACC-1)和相關(guān)蛋白(SREBP-1, FAS)表達明顯下調(diào)(P<0.05); JAZF1
10、抑制增多FFAs誘導的PMH和HepG2細胞內(nèi)脂滴的累積,與HK組比較,shJAZF1組在FFAs誘導的兩種脂肪變性肝細胞中脂肪酸從頭合成相關(guān)基因的 mRNA(SREBP-1c,SCD-1,F(xiàn)AS,ACC-1)和相關(guān)蛋白(SREBP-1,F(xiàn)AS)表達明顯上調(diào)(P<0.05);與Ad-GFP組比較,Ad-JAZF1組在FFAs誘導的兩種脂肪變性肝細胞中AMPK及其下游靶蛋白ACC的磷酸化均明顯增加;與HK組比較,shJAZF1組在FFAs
11、誘導的HepG2脂肪變性肝細胞中AMPK及其下游靶蛋白ACC的磷酸化均明顯下降,在PMH脂肪變性肝細胞中,AMPK的磷酸化雖下降趨勢不明顯,但是ACC的磷酸化下降有明顯差異(P<0.05);雙熒光素酶報告基因分析JAZF1基因在基礎(chǔ)狀態(tài)下對SREBP-1c基因啟動子無明顯調(diào)控作用(p>0.05),但是在胰島素刺激下,JAZF1基因可顯著下調(diào)胰島素誘導的SREBP-1c基因啟動子的活性(p<0.05)。
結(jié)論: JAZF1激活A
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