姜黃素抑制K562細胞生長并誘導(dǎo)凋亡機制的研究.pdf

1、目的：
　　 觀察姜黃素誘導(dǎo)人白血病細胞株K562凋亡作用及其細胞周期的變化,同時觀察其對凋亡相關(guān)基因BCL-XL和BAK表達的影響。探討姜黃素抑制人白血病細胞K562生長并誘導(dǎo)凋亡的機制,指導(dǎo)臨床白血病的化學(xué)藥物治療。
　　 材料與方法
　　 1細胞培養(yǎng)
　　 以人類白血病細胞株K562為研究對象。將K562細胞置于體積分?jǐn)?shù)為10％的新生胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中,37℃、5％二氧化碳孵箱中培

2、養(yǎng):取對數(shù)生長期細胞,0.4％臺盼藍染色,細胞活性在98％以上,調(diào)整細胞密度為1×106個/mL,0.9ml/孔接種于24孔板進行實驗。
　　 2實驗檢測
　　 將對照組和經(jīng)10umol/L、30umol/L、50umol/L、100umol/L的姜黃素干預(yù)的實驗組細胞于24h和48h后分別收集起來,用流式細胞儀檢測凋亡率和細胞周期的變化,RT-PCR方法檢測BCL-XL和BAK的mRNA的表達變化,免疫組化法檢測BCL

3、-XL和BAK蛋白的表達。
　　 3統(tǒng)計學(xué)處理
　　 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示,經(jīng)方差齊性檢驗后采用單因素方差分析,以α=0.05為檢驗水準(zhǔn)。
　　 結(jié)果：
　　 姜黃素可以對K562細胞有較明顯的增殖抑制作用,且呈劑量依賴與時間依賴,流式細胞術(shù)結(jié)果顯示姜黃素濃度在100μM時作用24小時后,凋亡率為(58.53±1.08)％,對照組凋亡率為(1.12±0.2

4、0)％,與對照組相比明顯增高(P<0.05)；姜黃素濃度在100μM時作用48小時后,凋亡率為(84.70±1.53)％,對照組凋亡率為(1.25±0.19)％,與對照組相比明顯增高(P<0.05)；隨著姜黃素濃度增加,作用于K562細胞后可以使其倍增時間明顯延長,G1期細胞增多,S期細胞減少；RT-PCR結(jié)果顯示姜黃素能下調(diào)K562細胞BCL-XL mRNA的表達,上調(diào)BAKmRNA的表達(P<0.05),免疫組化法發(fā)現(xiàn)姜黃素可以降低