ZnPcH-,1--PDT對SHI-1細胞殺傷作用的實驗研究.pdf

1、目的: ①研究光敏劑ZnPcH1在正常骨髓單個核細胞(MNC)、急性單核細胞白血病細胞系SHI-1細胞內(nèi)的代謝情況。 ②探討酞菁鋅介導的光動力療法(ZnPcH1-PDT)對SHI-1細胞的增殖抑制作用及其機制。 方法: ①應用熒光光譜分析法檢測正常骨髓MNC、SHI-1細胞內(nèi)的ZnPcH1含量，了解正常骨髓MNC、SHI-1細胞ZnPcH1含量的變化差異。 ②應用MTT比色法、臺盼蘭拒染法、白血病

2、細胞集落培養(yǎng)觀察ZnPcH1-PDT對SHI-1細胞的生長抑制作用，設(shè)立三個對照組(空白對照組、光照對照組、PS對照組)。 ③通過AO/EB復合染色、TUNEL、DNA二倍體分析、Annexin-V/FITC/PI雙染流式細胞檢測等手段來分析ZnPcH1-PDT作用后SHI-1細胞的凋亡情況。 ④應用激光掃描共聚焦顯微鏡和特異的細胞器探針對光敏劑ZnPcH1進行亞細胞定位。 結(jié)果: ①正常骨髓MNC與SH

3、I-1細胞內(nèi)ZnPcH1濃度變化存在差異：在與ZnPcH1共孵育5h時，SHI-1細胞系與正常MNC細胞內(nèi)的ZnPcH1含量比值達到最高值。因此，可據(jù)此來優(yōu)化實驗條件，ZnPcH1-PDT處理細胞時選用與ZnPcH1孵育5h后再行光照。 ②ZnPcH1-PDT對SHI-1細胞有顯著的殺傷作用：不同濃度的ZnPcH1-PDT組對SHI-1細胞均有殺傷作用，與對照組相比均有顯著性差別(p<0.01)，并呈ZnPcH1劑量相關(guān)。隨著Z

4、nPcH1濃度的增加，CFU-SHI-1形成率顯著下降；1.0μm ZnPcH1-PDT可完全抑制SHI-1細胞集落形成；而三個對照組間無顯著性差別(p>0.05)。 ③ZnPcH1-PDT可誘導SHI-1細胞發(fā)生細胞凋亡，且48h內(nèi)細胞凋亡陽性率呈時間依賴性：AO/EB復合染色結(jié)果可見處理組的SHI-1細胞核內(nèi)染色質(zhì)濃縮聚集或成碎片，呈現(xiàn)凋亡表象。TUNEL檢測可見明顯的棕色核凋亡細胞；FCM檢測Annexin-V/FITC/

5、PI顯示，細胞凋亡陽性率隨著時間的延長而逐漸增高；細胞周期分析顯示各處理組均可見亞二倍體Gl峰(凋亡峰)。 ④利用熒光探針的細胞器特異性分布確定ZnPcH1在細胞器中的位置，通過直接觀察法、偽彩色融合法、相關(guān)系數(shù)法表明ZnPcH1定位于SHI-1細胞中的線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、溶酶體中。　　 結(jié)論: ①正常骨髓MNC與SHI-1細胞內(nèi)znPcH1濃度的動態(tài)變化存在差異，即孵育5h時SHI-1細胞與正常MNC內(nèi)的ZnPcH