ZnPcH-,1--PDT對SHI-1細(xì)胞殺傷作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的: ①研究光敏劑ZnPcH1在正常骨髓單個(gè)核細(xì)胞(MNC)、急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系SHI-1細(xì)胞內(nèi)的代謝情況。 ②探討酞菁鋅介導(dǎo)的光動(dòng)力療法(ZnPcH1-PDT)對SHI-1細(xì)胞的增殖抑制作用及其機(jī)制。 方法: ①應(yīng)用熒光光譜分析法檢測正常骨髓MNC、SHI-1細(xì)胞內(nèi)的ZnPcH1含量，了解正常骨髓MNC、SHI-1細(xì)胞ZnPcH1含量的變化差異。 ②應(yīng)用MTT比色法、臺盼蘭拒染法、白血病

2、細(xì)胞集落培養(yǎng)觀察ZnPcH1-PDT對SHI-1細(xì)胞的生長抑制作用，設(shè)立三個(gè)對照組(空白對照組、光照對照組、PS對照組)。 ③通過AO/EB復(fù)合染色、TUNEL、DNA二倍體分析、Annexin-V/FITC/PI雙染流式細(xì)胞檢測等手段來分析ZnPcH1-PDT作用后SHI-1細(xì)胞的凋亡情況。 ④應(yīng)用激光掃描共聚焦顯微鏡和特異的細(xì)胞器探針對光敏劑ZnPcH1進(jìn)行亞細(xì)胞定位。 結(jié)果: ①正常骨髓MNC與SH

3、I-1細(xì)胞內(nèi)ZnPcH1濃度變化存在差異：在與ZnPcH1共孵育5h時(shí)，SHI-1細(xì)胞系與正常MNC細(xì)胞內(nèi)的ZnPcH1含量比值達(dá)到最高值。因此，可據(jù)此來優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，ZnPcH1-PDT處理細(xì)胞時(shí)選用與ZnPcH1孵育5h后再行光照。 ②ZnPcH1-PDT對SHI-1細(xì)胞有顯著的殺傷作用：不同濃度的ZnPcH1-PDT組對SHI-1細(xì)胞均有殺傷作用，與對照組相比均有顯著性差別(p<0.01)，并呈ZnPcH1劑量相關(guān)。隨著Z

4、nPcH1濃度的增加，CFU-SHI-1形成率顯著下降；1.0μm ZnPcH1-PDT可完全抑制SHI-1細(xì)胞集落形成；而三個(gè)對照組間無顯著性差別(p>0.05)。 ③ZnPcH1-PDT可誘導(dǎo)SHI-1細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞凋亡，且48h內(nèi)細(xì)胞凋亡陽性率呈時(shí)間依賴性：AO/EB復(fù)合染色結(jié)果可見處理組的SHI-1細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)濃縮聚集或成碎片，呈現(xiàn)凋亡表象。TUNEL檢測可見明顯的棕色核凋亡細(xì)胞；FCM檢測Annexin-V/FITC/

5、PI顯示，細(xì)胞凋亡陽性率隨著時(shí)間的延長而逐漸增高；細(xì)胞周期分析顯示各處理組均可見亞二倍體Gl峰(凋亡峰)。 ④利用熒光探針的細(xì)胞器特異性分布確定ZnPcH1在細(xì)胞器中的位置，通過直接觀察法、偽彩色融合法、相關(guān)系數(shù)法表明ZnPcH1定位于SHI-1細(xì)胞中的線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、溶酶體中?！　?結(jié)論: ①正常骨髓MNC與SHI-1細(xì)胞內(nèi)znPcH1濃度的動(dòng)態(tài)變化存在差異，即孵育5h時(shí)SHI-1細(xì)胞與正常MNC內(nèi)的ZnPcH