高三尖杉酯堿誘導(dǎo)急性髓系白血病SHI-1細胞凋亡及對MiR-143、DNMT3A、PTEN基因表達的研究.pdf

1、急性髓系白血病(AML)為血液系統(tǒng)惡性腫瘤性疾病,目前臨床上治療方法以化學藥物治療為主。雖然大多數(shù)AML患者接受強化治療能達到完全緩解,但是復(fù)發(fā)的概率仍然很高,五年總生存率低,使之成為嚴重危害人類健康的惡性疾病之一。急性單核細胞白血病(AML-M5)是急性髓系白血病的一種難治特殊亞型,治療效果較差。本課題組前期研究從我國特有植物三尖杉屬海南粗榧中提取分離出的生物堿高三尖杉酯堿(Homoharringtonine,HHT)對急性髓系白血病

2、細胞增殖信號PI3K/Akt的靶向作用以及急性髓系白血病細胞凋亡的途徑出發(fā),發(fā)現(xiàn)HHT具有能夠體外抑制急性早幼粒細胞白血病(AML-M3)細胞株NB4生長的作用,并可在一定范圍內(nèi)可以誘導(dǎo)細胞凋亡,凋亡率呈劑量依賴性?；诖私Y(jié)果,本研究分別用不同濃度誘導(dǎo)AML-M5-SHI-1細胞凋亡,進一步通過測定相關(guān)基因等變化探究HHT誘導(dǎo)SHI-1細胞凋亡可能的機制,為此后急性髓系白血病的靶向治療和聯(lián)合治療提供依據(jù)。
　　目的研究高三尖杉酯堿

3、(Homoharringtonine,HHT)作用于急性單核細胞白血病(AML-M5)SHI-1細胞株的機制,是否可抑制AML-M5細胞的增殖、誘導(dǎo)細胞凋亡;了解HHT對AML-M5 SHI-1細胞膜電位的影響,即其誘導(dǎo)的細胞凋亡是否通過線粒體介導(dǎo)的細胞凋亡途徑實現(xiàn)。以及HHT對miRNA-143、DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3A(DNA methyltransferase3A,DNMT3A)、PTEN基因表達的影響,初步探討miRNA-143、D

4、NMT3A與PTEN-PI3K/Akt信號傳導(dǎo)通路的關(guān)系
　　方法將不同濃度(5、10、50、100、500μg/L)的HHT作用SHI-1細胞,瑞氏染色觀察細胞鏡下形態(tài)學改變、流式細胞術(shù)Annexin V/PI法檢測細胞凋亡、CCK-8法測細胞增殖抑制作用、線粒體膜電位試劑盒(線粒體染料JC-1活細胞染色)檢測線粒體跨膜膜電位(Δψm)變化。莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄實時定量PCR及RT-PCR法檢測細胞PTEN、DNMT3A基因mRNA及mi

5、R-143在藥物作用前及不同濃度藥物作用下表達。
　　結(jié)果 HHT能有效抑制SHI-1細胞的增殖、誘導(dǎo)其凋亡,隨著藥物濃度的增高,細胞凋亡率、增殖抑制率明顯增加(P<0.05)。流式細胞儀線粒體膜電位結(jié)果表明,HHT作用后存在明顯熒光變化,細胞線粒體膜電位下降,并成濃度相關(guān)性。HHT藥物干預(yù)前后SHI-1細胞株miR-143、DNMT3A及PTEN基因mRNA表達有明顯變化。其中 miRNA-143在處理前腫瘤細胞中表達低于普通對

6、照細胞,在凋亡細胞中表達增高,其表達量與其靶基因DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3A表達水平呈負相關(guān)。PTEN基因mRNA在藥物處理前表達低,處理后表達高,且與藥物濃度呈一定相關(guān)性,其結(jié)果與 miRNA-143表達檢測結(jié)果相平行。HHT能有效抑制 SHI-1細胞的增殖、誘導(dǎo)其凋亡,隨著藥物濃度的增高,細胞凋亡率、增殖抑制率明顯增加(P<0.05)。流式細胞儀線粒體膜電位結(jié)果表明,HHT作用后存在明顯熒光變化,細胞線粒體膜電位下降,并成濃度相關(guān)性。HHT

7、藥物干預(yù)前后SHI-1細胞株miR-143、DNMT3A及PTEN基因mRNA表達有明顯變化。其中miRNA-143在處理前腫瘤細胞中表達低于普通對照細胞,在凋亡細胞中表達增高,其表達量與其靶基因 DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3A表達水平呈負相關(guān)。PTEN基因mRNA在藥物處理前表達低,處理后表達高,且與藥物濃度呈一定相關(guān)性,其結(jié)果與miRNA-143表達檢測結(jié)果相平行。
　　結(jié)論 HHT可抑制AML-M5 SHI-1細胞株的增殖、誘導(dǎo)其凋亡