組織激肽釋放酶8在宮內(nèi)感染腦白質(zhì)損傷仔鼠海馬及血清中的表達(dá).pdf

1、目的：
　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)孕鼠腹腔注射脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）構(gòu)建宮內(nèi)感染腦白質(zhì)損傷仔鼠模型，觀(guān)察組織激肽釋放酶8（Kallikrein8,Neuropsin，KLK8）在仔鼠海馬及血清中的表達(dá)變化，以探討宮內(nèi)感染仔鼠發(fā)生腦白質(zhì)損傷的機(jī)制。
　　方法：
　　選取健康三月齡SD大鼠（Sprague-Dawley大鼠）52只，按照雌雄1：1的比例交配。受孕成功的孕鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組（對(duì)照組）和宮

2、內(nèi)感染組（感染組）；孕18天時(shí)，感染組孕鼠連續(xù)2天腹腔注射LPS，建立宮內(nèi)感染致腦白質(zhì)損傷仔鼠模型；對(duì)照組孕鼠注射同等劑量的生理鹽水。兩組孕鼠均正常飲食喂養(yǎng)及自由飲水，仔鼠生后由母鼠哺乳喂養(yǎng)，選擇生后1日齡、3日齡、7日齡和14日齡4個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)每組有9只仔鼠，測(cè)量仔鼠出生體重及各個(gè)時(shí)間點(diǎn)時(shí)的體重、腦重，在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)9只仔鼠中隨機(jī)選取3只仔鼠取腦組織進(jìn)行HE染色觀(guān)察腦組織形態(tài)，其余6只留取海馬組織，兩側(cè)分別用Western bl

3、ot及RT-PCR檢測(cè)海馬組織中組織激肽釋放酶8的動(dòng)態(tài)表達(dá)，同時(shí)檢測(cè)血清中組織激肽釋放酶8的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1、兩組大鼠體重及腦重的動(dòng)態(tài)比較：感染組出生時(shí)及1日齡時(shí)體重降低（P＜0.05），到3日齡、7日齡、14日齡時(shí)體重與對(duì)照組無(wú)明顯差異（P＞0.05）；感染組1日齡仔鼠腦重降低（P＜0.01），到3日齡、7日齡、14日齡時(shí)腦重與對(duì)照組無(wú)明顯差異（P＞0.05）。
　　2、兩組大鼠腦組織HE染色的變化：感

4、染組SD大鼠生后1天、3天腦組織切片可見(jiàn)組織疏松、水腫；生后7天及14天腦白質(zhì)染色淡，結(jié)構(gòu)疏松呈篩網(wǎng)狀，細(xì)胞數(shù)減少。同時(shí)感染組還有腦室內(nèi)出血、腦白質(zhì)血管擴(kuò)張、毛細(xì)血管破裂出血等現(xiàn)象。對(duì)照組仔鼠腦組織切片見(jiàn)腦室周?chē)踪|(zhì)區(qū)域無(wú)明顯水腫，無(wú)明顯細(xì)胞減少。
　　3、兩組大鼠海馬組織中組織激肽釋放酶8的動(dòng)態(tài)表達(dá)：在四個(gè)時(shí)間點(diǎn)，1日齡時(shí)，兩組大鼠組織激肽釋放酶8的表達(dá)均低，3日齡時(shí)表達(dá)增加，7日齡和14日齡時(shí)明顯表達(dá)；Western blot

5、及RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比，在1日齡、3日齡及7日齡時(shí)感染組仔鼠組織激肽釋放酶8的表達(dá)均高于對(duì)照組（P＜0.05）。到14日齡時(shí)兩組表達(dá)無(wú)明顯差異（P＞0.05）。
　　4、血清組織激肽釋放酶8表達(dá)水平比較：四個(gè)時(shí)間點(diǎn)，在1日齡時(shí)表達(dá)最低，隨著日齡漸增加，到7日齡與14日齡時(shí)明顯表達(dá)；兩組比較，在1日齡、3日齡及7日齡時(shí)感染組仔鼠較對(duì)照組高（P＜0.05），到14日齡時(shí)兩組表達(dá)無(wú)明顯差異（P＞0.05）。
　　5、組

6、織激肽釋放酶8血清表達(dá)水平與Western blot半定量檢測(cè)海馬中蛋白量的相關(guān)性分析：海馬組織中KLK8表達(dá)的值與血清濃度值之間均呈正相關(guān)關(guān)系，直線(xiàn)等級(jí)相關(guān)系數(shù)為0.759(P<0.01)。
　　結(jié)論：
　　1、孕鼠腹腔注射LPS能建立宮內(nèi)感染大鼠腦白質(zhì)損傷模型。
　　2、孕鼠腹腔注射LPS建立的宮內(nèi)感染腦白質(zhì)損傷仔鼠，出生時(shí)體重、腦重低，生后腦白質(zhì)染色淡，結(jié)構(gòu)疏松呈篩網(wǎng)狀，細(xì)胞數(shù)減少，并有腦室內(nèi)出血、腦白質(zhì)血管擴(kuò)張