原代培養(yǎng)大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞液壓沖擊損傷蛋白質(zhì)表達(dá)譜的變化及意義.pdf

1、目的：研究液壓沖擊損傷大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞蛋白質(zhì)表達(dá)譜，探尋腦損傷生物標(biāo)志蛋白。 方法：選用出生后24h內(nèi)SD大鼠，取大腦皮質(zhì)于DMEM-F12培養(yǎng)基中進(jìn)行星形膠質(zhì)細(xì)胞體外分離培養(yǎng)和純化，并以膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)免疫細(xì)胞化學(xué)染色進(jìn)行鑒定。隨機(jī)分為對(duì)照組和損傷后4h、8h、12h、24h、48h組，復(fù)制重度液壓沖擊損傷模型。臺(tái)盼藍(lán)染色和PI/Hoechst3342染色觀察星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷后時(shí)序性變化；采用弱陽離子交換芯片(WC

2、X-2)和強(qiáng)陰離子交換芯片(SAX2)結(jié)合表面增強(qiáng)激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)分析大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞液壓沖擊損傷后不同時(shí)間蛋白質(zhì)表達(dá)譜的改變。 結(jié)果： 1.星形膠質(zhì)細(xì)胞的原代培養(yǎng)及純化純化傳代后，星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)單一，胞體較大而扁、胞質(zhì)較豐富、形狀不規(guī)則；胞突豐富、分支多呈放射狀，一級(jí)胞突較粗，常有二級(jí)分支；胞核圓形或橢圓形，常偏于胞體一側(cè)。 2.星形膠質(zhì)細(xì)胞的鑒定經(jīng) GFAP 免疫細(xì)胞化學(xué)染色(SP法)及免疫熒光

3、染色鑒定，陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)，星形膠質(zhì)細(xì)胞可達(dá)95％以上。 3.液壓沖擊損傷后星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化0.2MPa沖擊壓力下，細(xì)胞明顯腫脹，細(xì)胞間隙增大，有少量脫壁，死亡細(xì)胞數(shù)增多；沖擊壓力達(dá)0.8MPa時(shí)，大片細(xì)胞壞死，失去正常細(xì)胞結(jié)構(gòu)，細(xì)胞連接斷開，成片狀脫壁，有些區(qū)域只剩下零星單個(gè)細(xì)胞。PI/Hoechst3342染色可觀察到凋亡細(xì)胞。 4.蛋白質(zhì)芯片檢測。 結(jié)論： 1.液壓沖擊損傷可引起皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞