乙醇對原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元形態(tài)及細胞活性的影響.pdf

1、背景與目的：
　　現(xiàn)如今，“酒”已經(jīng)成為人們日常生活中必不可少的一種“飲料”，甚至發(fā)展成為一種文化。酒其主要成分是乙醇，而乙醇是一種在體內可自由擴散且氧化、代謝緩慢的物質，對人體許多系統(tǒng)臟器均有損傷作用，且能輕易地通過血腦屏障，導致大腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損傷。在我國，由于人們生活水平的不斷提高，并受我國傳統(tǒng)飲酒文化的影響，以及“酒”在社會人際交流中的作用，乙醇濫用、乙醇中毒現(xiàn)象呈增長趨勢，并呈現(xiàn)年輕化趨勢。而在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，海馬神經(jīng)

2、元對乙醇損傷的敏感性比較高，可引起海馬神經(jīng)元結構和功能的改變，造成學習記憶認知功能的損害。本研究主要是通過體外培養(yǎng)原代大鼠海馬神經(jīng)元，觀察在不同濃度乙醇的作用下，其形態(tài)學和細胞活性發(fā)生的變化，為進一步探究乙醇對神經(jīng)元損傷的作用機制提供一定的依據(jù)。
　　方法：
　　從實驗室飼養(yǎng)的24h出生的SD大鼠乳鼠，分離出海馬神經(jīng)元，在體外無血清培養(yǎng)至第7天，經(jīng)NSE免疫細胞化學染色鑒定海馬神經(jīng)元的純度。將培養(yǎng)好的海馬神經(jīng)元隨機分為低劑量

3、組、中劑量組、高劑量組和對照組，在培養(yǎng)液中加入無水乙醇，使培養(yǎng)液中乙醇的終濃度分別為11mM，33mM，66mM，對照組在培養(yǎng)液中加入等量生理鹽水，在二氧化碳培養(yǎng)箱共同培養(yǎng)1h、12h、24h。然后通過免疫細胞化學染色觀察不同濃度不同作用時間干預下海馬神經(jīng)元的形態(tài)學變化，用CCK-8試劑盒檢測海馬神經(jīng)元活性的變化。
　　結果：
　　1.不同濃度不同作用時間乙醇干預下海馬神經(jīng)元的形態(tài)學變化：低劑量組加入11mM乙醇，各時間段細

4、胞形態(tài)未發(fā)生明顯改變，胞漿和突起著色的深淺未發(fā)生明顯變化，神經(jīng)元的特征與正常對照組基本相同。中劑量組加入33mM乙醇，作用1h后極個別細胞的邊緣變得模糊不清，細胞未出現(xiàn)明顯的聚集現(xiàn)象，細胞突起數(shù)量減少不明顯。作用12h后細胞開始出現(xiàn)聚集現(xiàn)象，呈簇狀，可見神經(jīng)膠質細胞開始增殖。作用24h后可見細胞密度明顯降低，細胞之間的突觸連接減少，每個細胞的突起數(shù)量減少，但仍可見稀疏的神經(jīng)網(wǎng)絡。高劑量組加入66mM乙醇，作用1h后細胞的突起長度變短，突

5、起數(shù)量變少。作用12h后細胞簇狀聚集現(xiàn)象明顯，神經(jīng)膠質細胞增殖大量增殖。作用24h后細胞大量死亡，細胞密度極低，細胞的突起變短，細胞間的突觸連接極少，幾乎不能形成神經(jīng)網(wǎng)絡。
　　2.不同濃度不同作用時間乙醇干預下海馬神經(jīng)元的活性變化：不同濃度乙醇對海馬神經(jīng)元細胞活性的影響與對照組相比有明顯的變化，細胞活性在不同作用時間均有下降，活性改變的程度與乙醇作用濃度呈劑量依賴關系，尤其是高濃度組對海馬神經(jīng)元活性的改變更為明顯。相同濃度乙醇在

6、不同的作用時間對海馬神經(jīng)元的活性的影響與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義。
　　結論：
　　1.采用陰道涂片法和循環(huán)交配法相結合的方法，成功獲取精確妊娠孕鼠和P0期乳鼠，簡化動物繁殖過程，保證實驗中乳鼠的供給。
　　2.中、高劑量的乙醇會造成原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元的胞體損傷，細胞間的突觸連接減少，突起長度變短，突起數(shù)量減少，且與作用時間相關聯(lián)。
　　3.不同濃度的乙醇能夠引起原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元活性的降低，與乙醇濃度