北冬蟲夏草主要有效成分的含量測(cè)定研究.pdf

1、北蟲草[Cordyceps militaris(L.ex Fr.) Link]是我國(guó)一種重要藥用真菌，具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗氧化、降血糖和保肝等藥理作用，用于肺結(jié)核、老人虛弱和貧血等疾病的治療。目前衡量北蟲草質(zhì)量的重要指標(biāo)是有效成分甘露醇、蟲草多糖和蟲草核苷的含量測(cè)定，目前這三種主要有效成分的測(cè)定方法很多，測(cè)定結(jié)果也有較大差異。本論文運(yùn)用高效陰離子色譜、高效液相等先進(jìn)手段，研究北蟲草中甘露醇、蟲草多糖和蟲草核苷的含量測(cè)定，并與目前經(jīng)常

2、使用的方法進(jìn)行比較，為北蟲草中有效成分的準(zhǔn)確測(cè)定建立科學(xué)依據(jù)。
　　 目前甘露醇最常用的測(cè)定方法是比色法，其最大的缺點(diǎn)在于無法去除類似糖醇的干擾。本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用HPLC法和高效離子色譜法兩種方法對(duì)北蟲草中甘露醇進(jìn)行測(cè)定，并與比色法進(jìn)行比較。HPLC法和高效離子色譜法這兩個(gè)方法都能將甘露醇與其它單糖或糖醇有效分離，方法學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，這兩種方法重復(fù)性好、精密度高和重現(xiàn)性好，且加樣回收率在95-105％之間，適合于北蟲草中甘露醇的測(cè)定。對(duì)三

3、種方法測(cè)定北蟲草中甘露醇含量進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)HPLC法和高效離子色譜法測(cè)定值間無顯著差異，而比色法測(cè)得值明顯高于HPLC法及離子色譜法，并有顯著性差異。因此，高效液相法和高效陰離子色譜法都能將北蟲草中干擾物質(zhì)有效分離，是準(zhǔn)確測(cè)定北蟲草中甘露醇的含量的方法。
　　 北蟲草多糖的含量測(cè)定基本方法為苯酚-濃硫酸法，由于不同文獻(xiàn)中蟲草多糖的測(cè)定結(jié)果相差非常大。為準(zhǔn)確測(cè)定北蟲草中甘露醇含量，本試驗(yàn)運(yùn)用高效陰離子法測(cè)定干擾物質(zhì)，比較水提醇沉和

4、醇提水提兩種多糖前處理后的測(cè)定液中干擾物質(zhì)的含量，以及對(duì)多糖含量測(cè)定的影響，建立準(zhǔn)確的多糖測(cè)定方法。結(jié)果發(fā)現(xiàn)水提醇沉法前處理后，提取液中干擾物質(zhì)仍超過10％，而且步驟多，重復(fù)性差。而醇提水提法簡(jiǎn)便、快速、精確，處理后的提取液干擾物質(zhì)低于1％，適用于北蟲草中多糖測(cè)定的前處理。同時(shí)對(duì)提取方法進(jìn)行優(yōu)化，測(cè)定的最佳方法為，先用80％乙醇提取2次，提取溫度100°，提取時(shí)間3小時(shí)，液料比1∶100，此方法穩(wěn)定，重復(fù)性好，適合北蟲草中多糖含量測(cè)定。

5、
　　 核苷類成分是北蟲草中主要活性成分，通過核苷類指紋圖譜發(fā)現(xiàn)，除已知核苷類成分蟲草素、腺苷外，還有一個(gè)含量較高的未知峰。為明確指紋圖譜中未知峰化學(xué)成分，運(yùn)用NKA-Ⅱ大孔吸附樹脂和C-18分離純化得到了未知峰的結(jié)晶，通過1HNMR，13CNMR、質(zhì)譜等波譜分析，并文獻(xiàn)報(bào)道數(shù)據(jù)進(jìn)行比對(duì)，鑒定出化合物為N6-（2-羥乙基）-腺苷。運(yùn)用高效液相法，建立了蟲草素、腺苷和N6-(2-羥乙基)腺苷的測(cè)定方法。最優(yōu)提取條件為超聲30min