具ACE抑制活性的益生乳酸菌的篩選與特性研究.pdf

1、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(AngiotensinConvertingEnzyme，ACE)在腎素-血管緊張素RAS系統(tǒng)和激肽-激肽釋放酶KKS系統(tǒng)中起著重要的調(diào)節(jié)作用。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(AngiotensinConvertingEnzymeInhibitor，ACEI)可有效地抑制ACE酶的活性，從而保持生物體的血壓穩(wěn)定。利用乳酸菌在生長過程中的蛋白質(zhì)代謝，可以發(fā)酵產(chǎn)生ACE抑制肽，達(dá)到降血壓的目的。乳酸菌發(fā)酵生產(chǎn)ACE抑制肽為ACE抑制

2、肽的生物合成提供了另一種有效的途徑。 本文以我國傳統(tǒng)發(fā)酵食品四川豆豉巴、朝鮮族泡菜、朝鮮族豆醬、西藏靈菇和新疆酸奶子中的微生物為目標(biāo)菌群，應(yīng)用SL和MRS培養(yǎng)基、ACEI紫外分光光度檢測法和模擬胃腸消化分析、耐酸耐膽汁益生實(shí)驗(yàn)，從中篩選出具有血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制活性的益生乳酸菌CZ2112。采用自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)，將CZ2112發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行SHR的灌胃，應(yīng)用尾動脈間接測壓法檢測24h內(nèi)SHR的SAP變化，經(jīng)驗(yàn)證該發(fā)酵產(chǎn)物

3、有一定的降血壓作用，且不產(chǎn)生明顯的抑制心率作用。經(jīng)API細(xì)菌學(xué)鑒定系統(tǒng)和16SrDNA鑒定，CZ2112為乳酸菌屬植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)。對比卡托普利的ACEI，植物乳桿菌CZ2112發(fā)酵形成的ACE抑制肽的抑制類型為非競爭性抑制。 測定了CZ2112菌株的最高、最低和最適生長溫度分別為52℃、17℃和35℃。最高、最低和最適起始生長pH為9.5、3.8和6.0。測定CZ2112菌株在MRS和

4、RSM培養(yǎng)基中的生長曲線。CZ2112菌株在MRS中4h進(jìn)入對數(shù)生長期，12h進(jìn)入穩(wěn)定期，生長很旺盛；而在RSM中，生長比較緩慢，產(chǎn)酸能力很弱。CZ2112的蛋白水解活性在發(fā)酵初期增長速度很快，18h達(dá)到峰值，即OPA指數(shù)為0.58，蛋白水解活性隨培養(yǎng)時間緩慢下降并在菌體的穩(wěn)定期后期維持在一個水平，即OPA指數(shù)在0.35左右。CZ2112發(fā)酵產(chǎn)物的ACE抑制率隨菌體生長速率的增減而增減，在32h達(dá)到抑制活性的最大值即穩(wěn)定期后期出現(xiàn)最高抑

5、制率81.5％。CZ2112開始生長后的8h內(nèi)顯示出兩個自溶行為的高峰，一個是發(fā)生在由遲滯期向?qū)?shù)生長期的過渡期，另一個是發(fā)生在由對數(shù)生長期向穩(wěn)定期的過渡期。 藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，CZ2112對四環(huán)素、紅霉素、氨芐青霉素、青霉素四種抗生素不敏感；對氯霉素、鏈霉素、慶大霉素、氟派酸、頭孢他啶、氧哌嗪青霉素六種抗生素敏感。 通過比較不同金屬離子對CZ2112發(fā)酵產(chǎn)物ACE抑制率的影響，發(fā)現(xiàn)K+、Na+、Cu2+、Fe2+對AC

6、E抑制率幾乎無影響，Mn2+、Mg2+對ACE抑制率有抑制，Ca2+對ACE抑制率有明顯的促進(jìn)作用。比較蛋白濃度固形物含量、接種量、NaCl濃度、CaCl2濃度、Tween-80對CZ2112發(fā)酵產(chǎn)物ACE抑制率的影響。經(jīng)SAS軟件分析，得到接種量、Tween-80、CaCl2添加量對發(fā)酵產(chǎn)物抑制率的影響最顯著。最終確定固形物含量為10％，NaCl添加量為0.9％，CaCl2添加量為0.37mM，發(fā)酵時的接種量為4％，Tween-80添