復(fù)合營(yíng)養(yǎng)素對(duì)認(rèn)知與運(yùn)動(dòng)功能損傷大鼠的干預(yù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：建立認(rèn)知與運(yùn)動(dòng)功能損傷大鼠模型；觀察復(fù)合營(yíng)養(yǎng)素配方對(duì)認(rèn)知與運(yùn)動(dòng)功能損傷大鼠的改善效果，并初步闡明其作用機(jī)制。 方法： (1)海馬內(nèi)注射β淀粉樣蛋白(Aβ)致認(rèn)知與運(yùn)動(dòng)功能損傷大鼠模型的探討。3～4月齡雄性SD大鼠27只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、Aβ組和生理鹽水組，每組9只。正常對(duì)照組不作任何處理，Aβ組每側(cè)海馬內(nèi)注射1μlAβ，生理鹽水組海馬內(nèi)注射等體積生理鹽水。海馬內(nèi)注射兩周后，觀察海馬病理學(xué)改變；水迷宮、避暗實(shí)驗(yàn)檢

2、測(cè)大鼠的學(xué)習(xí)、記憶功能；熒光分光光度法測(cè)定血清維生素A、E含量；紫外分光光度法測(cè)定血清維生素C含量；化學(xué)發(fā)光競(jìng)爭(zhēng)免疫法測(cè)定血清葉酸含量；原子吸收分光光度法測(cè)定血清鐵、銅、鋅含量；氣相色譜法測(cè)定血清游離脂肪酸含量；全血谷胱甘肽還原酶、紅細(xì)胞天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶活性、血清和腦組織乙酰膽堿酯酶(AChE)活性也采用紫外分光光度法。 (2)老齡大鼠作為認(rèn)知與運(yùn)動(dòng)功能損傷動(dòng)物模型的研究。雄性Wistar大鼠16只，分為老齡組(15月齡)和青年

3、組(3月齡)，每組8只。水迷宮、rod walking及plank walking實(shí)驗(yàn)檢測(cè)大鼠的行為學(xué)功能。 (3)復(fù)合營(yíng)養(yǎng)素對(duì)老齡大鼠認(rèn)知與運(yùn)動(dòng)功能的干預(yù)作用及機(jī)制研究。選取15月齡Wistar大鼠，雄性14只，雌性16只，隨機(jī)分為干預(yù)組和對(duì)照組，每組雄性7只，雌性8只。干預(yù)組大鼠飼喂添加復(fù)合營(yíng)養(yǎng)素的自制飼料，同時(shí)灌胃植物提取物混合液，而對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼料，同時(shí)灌胃蒸餾水。灌胃劑量為4ml/(kg bw·d)。實(shí)驗(yàn)干預(yù)期為10

4、周。采用水迷宮、rod walking實(shí)驗(yàn)檢測(cè)大鼠的認(rèn)知及運(yùn)動(dòng)行為；熒光分光光度法檢測(cè)腦組織去甲腎上腺素(NE)、5-羥色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、血清VE含量；紫外分光光度法測(cè)定腦組織乙酰膽堿(ACh)含量，血清總蛋白含量、白蛋白含量，腦組織及血清AChE活性，全血谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)活性，血清總抗氧化能力(T-AOC)、抑制羥自由基能力；神經(jīng)電生理法觀察海馬齒狀回長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)效應(yīng)的改變；二維凝膠電泳(2-DE)檢測(cè)

5、大鼠額葉皮層蛋白質(zhì)表達(dá)的變化，利用肽質(zhì)量指紋圖譜分析和數(shù)據(jù)庫(kù)檢索鑒定表達(dá)差異的蛋白，Western blotting驗(yàn)證stathmin 1蛋白的表達(dá)變化。 結(jié)果： (1)未觀察到A β組海馬組織A β沉著及明顯的病理變化。與正常對(duì)照組比較，A β組學(xué)習(xí)、記憶功能有下降趨勢(shì)，但差異無(wú)顯著性；A β組血清VC、鐵含量顯著下降；血清及腦組織AChE活性顯著升高；血清游離脂肪酸構(gòu)成發(fā)生顯著改變。 (2)與青年組大鼠比較

6、，老齡組大鼠認(rèn)知與運(yùn)動(dòng)功能下降。(3)與對(duì)照組比較，干預(yù)組老齡大鼠發(fā)生以下改變：①認(rèn)知與運(yùn)動(dòng)功能得到改善；抗氧化能力增強(qiáng)，血清VE含量增加；腦組織ACh、NE、5-HT、DA含量升高，而血清及腦組織．AChE活性顯著下降；②海馬齒狀回長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)幅度明顯提高，海馬突觸傳遞效能增強(qiáng)；③額葉皮層2-DE圖譜中11個(gè)蛋白點(diǎn)含量發(fā)生變化。質(zhì)譜鑒定的10種蛋白質(zhì)中，其中6種蛋白質(zhì)含量降低，分別為：丙酮酸激酶、丙酮酸脫氫酶E1 α1、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶

7、、線粒體肌酸激酶1、電壓依賴性陰離子通道2、磷酸丙糖異構(gòu)酶1；4種蛋白質(zhì)含量升高，分別為：過(guò)氧化物氧化還原酶2、線粒體H-ATP合酶d亞單位、stathmin1、Cu-Zn超氧化物歧化酶。④額葉皮層stathmin 1蛋白的表達(dá)量升高。 結(jié)論： (1)老齡大鼠可作為認(rèn)知與運(yùn)動(dòng)功能損傷的動(dòng)物模型研究復(fù)合營(yíng)養(yǎng)素的干預(yù)效果及其機(jī)制。 (2)復(fù)合營(yíng)養(yǎng)素對(duì)老齡大鼠的認(rèn)知與運(yùn)動(dòng)功能有改善作用，其作用途徑可能與改善大鼠的抗氧化