人牙髓細胞誘導成牙本質分化的蛋白質組學研究.pdf

1、中山大學博士學位論文人牙髓細胞誘導成牙本質分化的蛋白質組學研究姓名：韋曦申請學位級別：博士專業(yè)：口腔臨床醫(yī)學指導教師：凌均棨20070420人牙髓細胞誘導成牙本質分化的蛋白質組學研究中山大學博士學位論文干細胞特性并能大量擴增的細胞模型。在此基礎上，對DPCs進行礦化誘導，采用雙向膠內差異凝膠電泳(twodimensionaldifferentialgelelectrophoresis，2DDIGE)結合基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜(

2、matrixassisstedlaseradsorptionionization—timeofflightmassspectormetryMALDI—TOFMS)鑒定，對成牙本質細胞分化早期的差異蛋白質組進行研究。第一章人牙髓細胞的體外培養(yǎng)和鑒定目的：從人牙髓組織中分離培養(yǎng)DPCs，檢測STRO1的表達及其多向分化潛能，以探索具有干細胞特性并能大量擴增的細胞模型的建立方法。方法：采用酶消化法從成人健康阻生第三磨牙或因正畸拔除的雙尖牙牙髓

3、組織中分離培養(yǎng)DPCs，免疫細胞化學染色檢測第3代DPCs中STRO1的表達。細胞分別培養(yǎng)于成牙本質／成骨誘導培養(yǎng)基、成脂誘導培養(yǎng)基和成軟骨誘導培養(yǎng)基中，VonKossa染色和抗DSP免疫細胞化學染色檢測DPCs的成牙本質分化，油紅O染色和實時熒光定量RTPCR檢測DPCs的成脂分化，阿新藍染色和抗II型膠原免疫細胞化學染色檢測DPCs的成軟骨分化。結果：原代細胞接種后呈集落樣生長，擴大培養(yǎng)后的DPCs仍可見多個細胞集落。免疫細胞化學染

4、色顯示第3代DPCs表達STRO1。細胞經礦化誘導21d，VonKossa染色示褐色礦化結節(jié)；誘導前細胞抗DSP染色陰性，誘導iOd后抗DSP染色陽性。對照細胞未見油紅O陽性著色，成脂誘導后細胞內可見紅色的脂滴，脂肪特異性LPL和PPARy2mRNA水平顯著上調(p0001)。細胞經軟骨誘導21d，阿新藍染色見大量藍染區(qū)，免疫細胞化學染色示誘導細胞抗II型膠原陽性。結論：采用酶消化法分離培養(yǎng)的DPCs，表達STROI，可向成牙本質樣細胞