CUEDC2對急性胰腺炎腺泡細胞凋亡的影響.pdf

1、急性胰腺炎（Acute pancreatitis，AP）是由多種病因引起的急性炎癥反應，具有起病急驟，發(fā)展迅速，病情較重，并發(fā)癥較多等特點。臨床上大多數患著為輕度急性胰腺炎，病程呈自限性，預后較好，重度急性胰腺炎常伴有胰腺及周邊組織壞死，臨床病情兇險，病死率高。AP的發(fā)病機制復雜，近年來人們發(fā)現(xiàn)細胞凋亡在AP的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用，凋亡和壞死是AP時胰腺腺泡細胞死亡的兩種主要形式，二者最大本質區(qū)別是凋亡細胞形成凋亡小體后很快被巨噬細

2、胞所吞噬，不引起或很少引起炎癥反應，AP的嚴重性與壞死程度呈正相關，而與凋亡程度呈負相關。早期誘導腺泡細胞凋亡是治療AP的關鍵環(huán)節(jié)。
　　含CUE結構域蛋白2（CUE domain containing2，CUEDC2）是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種蛋白。CUEDC2可以抑制核因子-κB（nuclear factor-κB， NF-κB）信號通路和Janus激酶/信號轉導和轉錄活化因子（Janus kinase/signal transdu

3、cer and activator of tran-scriptions，JAK/STAT）信號通路，還能夠抑制巨噬細胞的激活及熱休克蛋白70的伴侶活性，CUEDC2也參與了細胞周期調節(jié)。文獻研究發(fā)現(xiàn) CUEDC2在不同腫瘤中的表達水平及作用不同。同時，CUEDC2也參與了調控炎癥反應，如梗阻性腎病、結腸炎相關腫瘤等。此外，CUEDC2還參與了心肌缺血再灌注損傷、慢性髓細胞白血病等細胞凋亡的相關研究。但目前尚無 CUEDC2在急性胰腺炎

4、中作用研究的報道，因而本研究從細胞凋亡的角度分析CUEDC2對急性胰腺炎腺泡細胞的影響。
　　目的：應用雨蛙素干預AR42J細胞建立AP離體細胞模型，采用質粒轉染技術對AR42J細胞CUEDC2進行過表達，探究CUEDC2對AP胰腺腺泡細胞凋亡的影響。
　　方法：
　　1.應用雨蛙素干預AR42J細胞建立AP模型。應用質粒轉染技術，構建過表達CUEDC2的AR42J細胞模型。
　　2.實驗分組：①陰性質粒對照組（

5、Neg-CON）：轉染pEGFP-N1質粒，完全培養(yǎng)基培養(yǎng)；②CUEDC2質粒對照組（CUEDC2-CON）：轉染pEGFP-N1-CUEDC2質粒，給予完全培養(yǎng)基培養(yǎng)；③陰性質粒雨蛙素組（Neg-CAE）：轉染pEGFP-N1質粒，給予含10-7 mmol/L雨蛙素培養(yǎng)基培養(yǎng)；④CUEDC2質粒雨蛙素組（CUEDC2-CAE）：轉染pEGFP-N1-CUEDC2質粒，給予含10-7 mmol/L雨蛙素培養(yǎng)基培養(yǎng)；再將細胞分為4h、8h

6、、24h三個亞組。
　　3.應用RT-PCR檢測CUEDC2 mRNA表達水平。應用Western blot檢測CUEDC2、Bax和Bcl-2蛋白表達水平。Annexin V-PE/7-AAD雙染聯(lián)合流式細胞術檢測造模后細胞早期凋亡率及晚期凋亡壞死率。
　　結果：
　　1.CUEDC2 mRNA表達：與對照組相比，雨蛙素組CUEDC2 mRNA表達量均降低，有統(tǒng)計學差異（P<0.05），并且隨著時間的進展，雨蛙素干預

7、的各組間表達水平無差異（P>0.05）。
　　2.建立過表達CUEDC2的AR42J細胞模型：比較各組CUEDC2蛋白表達水平，空白對照組和陰性質粒組之間無統(tǒng)計學差異（P>0.05）；CUEDC2質粒組表達高于其余兩組，與其余兩組比較均有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。可認為，成功建立了過表達CUEDC2的AR42J細胞模型。
　　3.Bax的表達：與各自對照組相比，陰性質粒雨蛙素組和CUEDC2質粒雨蛙素組Bax表達水平均增高

8、（P<0.05）。在兩個對照組中，CUEDC2質粒對照組與陰性質粒對照組相比，Bax表達增高（P<0.05），并且隨著時間延長無明顯變化。在兩個雨蛙素組中，CUEDC2質粒雨蛙素組與陰性質粒雨蛙素組相比，4h、8h時Bax表達增高（P<0.05），24h時無統(tǒng)計差異（P>0.05），并且隨著時間延長，陰性質粒雨蛙素組Bax表達逐漸增高，至8h最高，24h與8h無統(tǒng)計差異，而CUEDC2質粒雨蛙素組Bax表達與時間進展無相關性。
　

9、　4.Bcl-2的表達：與各自對照組相比，陰性質粒雨蛙素組和CUEDC2質粒雨蛙素組Bcl-2表達水平均增高（P<0.05）。在兩個對照組中，CUEDC2質粒對照組與陰性質粒對照組相比，Bcl-2表達降低（P<0.05），并且隨著時間延長無明顯變化。在兩個雨蛙素組中，CUEDC2質粒雨蛙素組與陰性質粒雨蛙素組相比，4h、8h時Bcl-2表達降低（P<0.05），24h時無統(tǒng)計差異（P>0.05），并且隨著時間延長，陰性質粒雨蛙素組Bcl

10、-2表達逐漸降低，至8h最低，24h與8h無統(tǒng)計差異，而CUEDC2質粒雨蛙素組Bcl-2表達與時間進展無相關性。
　　5.Bax/Bcl-2比值：與各自對照組相比，陰性質粒雨蛙素組和CUEDC2質粒雨蛙素組Bax/Bcl-2比值均增高（P<0.05）。在兩個對照組中，CUEDC2質粒對照組與陰性質粒對照組相比，Bax/Bcl-2比值增高（P<0.05），隨著時間延長無明顯變化。在兩個雨蛙素組中，CUEDC2質粒雨蛙素組與陰性質粒

11、雨蛙素組相比，4h、8h時 Bax/Bcl-2比值增高（P<0.05），24h時無統(tǒng)計差異（P>0.05），并且隨著時間延長，陰性質粒雨蛙素組Bax/Bcl-2比值逐漸增高，至8h最高，24h與8h無統(tǒng)計差異，而CUEDC2質粒雨蛙素組 Bax/Bcl-2比值與時間進展無相關性。并且，陰性質粒對照組Bax/Bcl-2比值小于1，即Bcl-2相對較高，而CUEDC2過表達后或者雨蛙素干預后Bax/Bcl-2比值大于1，即Bax相對較高。<

12、br>　　6.細胞早期凋亡率和晚期凋亡壞死率：與各自對照組相比，陰性質粒雨蛙素組和 CUEDC2質粒雨蛙素組早期凋亡率和晚期凋亡壞死率均增高（P<0.05）。在兩個對照組中，CUEDC2質粒對照組與陰性質粒對照組相比，早期凋亡率增高，晚期凋亡壞死率降低（P<0.05）。在兩個雨蛙素組中，CUEDC2質粒雨蛙素組與陰性質粒雨蛙素組相比，8h時早期凋亡率增高，晚期凋亡壞死率降低（P<0.05），而在24h時無統(tǒng)計差異（P>0.05）。