應(yīng)用血清蛋白質(zhì)組技術(shù)篩選鼻咽癌相關(guān)性抗原.pdf

1、鼻咽癌是東南亞及我國(guó)南方幾省常見(jiàn)的腫瘤，由于其臨床癥狀不明顯，鼻咽癌的早期診斷仍然比較困難。為了尋找新的鼻咽癌診斷標(biāo)志物，我們采用血清蛋白質(zhì)組學(xué)方法，對(duì)可以引起鼻咽癌患者體內(nèi)發(fā)生體液免疫反應(yīng)的腫瘤相關(guān)性抗原進(jìn)行了篩選。首先，用二維電泳技術(shù)一次性分離了鼻咽癌組織中上千個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)，然后，將這些蛋白質(zhì)點(diǎn)轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上，再分別與鼻咽癌患者自身血清及正常對(duì)照血清進(jìn)行Western blot反應(yīng)，尋找那些與多數(shù)鼻咽癌患者血清發(fā)生

2、抗原一抗體反應(yīng)，而沒(méi)有或很少與對(duì)照血清發(fā)生抗原一抗體反應(yīng)的蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定。在研究中，我們鑒定了13個(gè)這樣的蛋白質(zhì)，它們至少在21[％]的鼻咽癌患者血清中存在相應(yīng)抗體。其中，抗角蛋白19(CKl9)的抗體在47.4[％]的患者血清中能檢測(cè)到，但卻沒(méi)有在一例對(duì)照血清中檢測(cè)到。隨后，我們用免疫沉淀與 Westernblot反應(yīng)相結(jié)合的方法，將鼻咽部低分化鱗癌細(xì)胞株CNE2中CKl9沉淀下來(lái)，以CKl9作為抗原，對(duì)另外30例鼻咽癌患者血清

3、，23例其他腫瘤患者血清及20例正常血清中CKl9抗體的存在情況進(jìn)行了研究，結(jié)果在13例鼻咽癌患者血清、1例其他腫瘤患者血清和1例正常血清中檢測(cè)到了抗原一抗體反應(yīng)，這說(shuō)明抗CKl9抗體具有鼻咽癌特異性。為了初步探討CKl9誘導(dǎo)鼻咽癌患者發(fā)生體液免疫的原因，我們用免疫組化和Western blot反應(yīng)檢測(cè)了CKl9在鼻咽癌組織與鼻咽部正常粘膜上皮組織中的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)與鼻咽部正常粘膜上皮組織相比，CKl9在鼻咽癌組織中表達(dá)明顯升高。我們推

4、測(cè)過(guò)表達(dá)可能是CKl9引起鼻咽癌患者體內(nèi)發(fā)生體液免疫反應(yīng)的原因之一。除了CKl9外，我們對(duì)另外兩個(gè)分別在36.8％和47.4％的鼻咽癌患者血清中存在相應(yīng)抗體的蛋白質(zhì)Rho—GDI和EBPl的表達(dá)水平也進(jìn)行了檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)Rho-GDI在鼻咽癌組織和鼻咽部正常粘膜上皮組織中的表達(dá)沒(méi)有差別，而EBPl則在65％的鼻咽癌組織中檢測(cè)到表達(dá)升高。本研究篩選到了CKl9等13個(gè)能夠較特異地引起鼻咽癌患者體內(nèi)發(fā)生體液免疫反應(yīng)的腫瘤相關(guān)性抗原，為鼻咽癌早期