姜黃素對內(nèi)毒素急性肺損傷大鼠肺組織Survivin和Caspase-3表達(dá)的影響.pdf

1、目的：通過檢測內(nèi)毒素急性肺損傷（ALI)大鼠肺組織生存素（Survivin）以及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）的表達(dá)含量，探討姜黃素對ALI起保護(hù)的作用機(jī)制，為ALI的治療提供新的理論依據(jù)。
　　方法：把實驗SD型大鼠隨機(jī)分為1）Control(空白對照）組；2）LPS（模型）組；3）Cur（藥物對照）組；4）LPS+Cur(姜黃素干預(yù))組；按以下時間軸（2h、6h、12h、24h）劃分為組內(nèi)組（n=5)，按尾靜

2、脈注射脂多糖（LPS）的方法造模并用姜黃素藥物干預(yù)，在注射LPS后對應(yīng)的各時間點(diǎn)處置大鼠,并收集肺的組織標(biāo)本及肺泡灌洗液。檢測肺臟濕／干重量比（W/D）,光鏡下觀察各大組所對應(yīng)時間軸上肺組織發(fā)生的病理學(xué)損傷改變，并行肺泡損傷的半定量評價(IQA)及肺組織損傷改變評分，免疫組化（IHC）聯(lián)合圖象分析檢出各對應(yīng)時間軸上肺組織標(biāo)本Survivin以及Caspase-3的表達(dá)含量。用末端的原位細(xì)胞標(biāo)記（TUNEL）手段檢測肺組織標(biāo)本凋亡指數(shù)(A

3、I)，測肺泡灌洗液（BALF）中細(xì)胞的總計數(shù)及對應(yīng)的中性粒細(xì)胞（NEUT）百分比值，酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測BALF里IL-1β以及TNF-α的表達(dá)含量。
　　結(jié)果：
　　1.各時間點(diǎn)Control組及Cur組大鼠肺小葉結(jié)構(gòu)完整，肺泡結(jié)構(gòu)未見明顯異常；肺損傷模型（LPS）組肺組織病理學(xué)改變特點(diǎn)符合內(nèi)毒素ALI改變，姜黃素干預(yù)（LPS+Cur）組較模型（LPS）組肺損傷改變明顯減輕。
　　2.各大組肺組織損傷改

4、變的評分、IQA以及W/D的變化：LPS組、LPS+Cur組各時間軸上的肺組織其損傷改變的評分、IQA以及W/D均較Control組有明顯的增加（P<0.05）；Control組與Cur組之間各指標(biāo)無統(tǒng)計學(xué)差別（P>0.05）；LPS+Cur組較LPS組各時間軸的肺組織損傷改變的評分、IQA以及W/D均明顯下降（P<0.05），其中以6h差異最顯著。
　　3.免疫組織化學(xué)測定各組大鼠肺組織Survivin及Caspase-3的表達(dá)

5、:Survivin主要表達(dá)于炎性細(xì)胞、支氣管的上皮細(xì)胞及小血管的平滑肌細(xì)胞的胞質(zhì)中。Cur組與 Control組比較各時間軸之間 Survivin表達(dá)含量無統(tǒng)計學(xué)差別（P>0.05）；與Control組比較，LPS組、LPS+Cur組對應(yīng)的各時間軸上Survivin表達(dá)含量均明顯升高（P<0.01），且表達(dá)隨時間變化呈現(xiàn)先升高后緩慢下降的趨勢，于6 h時間點(diǎn)Survivin表達(dá)達(dá)高峰；LPS+Cur組較LPS組各時間軸的Survivin

6、表達(dá)含量明顯下降（P<0.05），其中以6 h差異最顯著。Caspase-3主要表達(dá)于肺泡的上皮細(xì)胞、支氣管的上皮細(xì)胞胞漿中。Cur組與Control組比較各時間軸之間Caspase-3表達(dá)含量無統(tǒng)計學(xué)差別（P>0.05）；各時間軸上LPS組、LPS+Cur組較Control組Caspase-3表達(dá)含量均明顯升高（P<0.05），其表達(dá)變化為隨時間延長呈現(xiàn)逐漸上升趨勢；LPS+Cur組Caspase-3表達(dá)含量較LPS組降低（P<0.0

7、5），其中以24h差異最顯著。
　　4.各組各時間軸對應(yīng)的大鼠肺標(biāo)本內(nèi)AI比較：Cur組與Control組比較AI值無統(tǒng)計學(xué)差別（P>0.05）；LPS組、LPS+Cur組較Control組AI值均明顯升高（P<0.01），LPS+Cur組較LPS組AI值降低（P<0.05）。
　　5.BALF中細(xì)胞總計數(shù)及對應(yīng)的 NEUT百分比值：Cur組與Control組比較BALF中細(xì)胞總計數(shù)及NEUT％均無統(tǒng)計學(xué)差別（P>0.05）

8、；對比Control組，LPS組、LPS+Cur組所對應(yīng)的各時間軸上BALF中細(xì)胞總計數(shù)及NEUT%均呈現(xiàn)顯著升高（P<0.01）；對比LPS組，LPS+Cur組所對應(yīng)的2h、12h、24h時間軸上BALF中細(xì)胞總計數(shù)及NEUT%均呈現(xiàn)降低(P<0.05)，且以對應(yīng)的6h時間軸上BALF中細(xì)胞總計數(shù)及NEUT%降低最顯著（P<0.01）。
　　6.ELISA檢測在BALF里IL-1β以及TNF-α的含量:Cur組與Control組

9、比較在BALF里IL-1β以及TNF-α的含量均無統(tǒng)計學(xué)差別（P>0.05）；對比Control組，LPS組、LPS+Cur組所對應(yīng)的各時間軸上TNF-α以及IL-1β的含量均顯著升高（P<0.01）；對比LPS組，LPS+Cur組所對應(yīng)的2h、12h、24h時間軸上IL-1β以及TNF-α含量降低（P<0.05）,且以對應(yīng)的6h時間軸上，LPS+Cur組的IL-1β以及TNF-α含量較LPS組降低最為顯著（P<0.01）。
　　

10、結(jié)論：
　　1.內(nèi)毒素急性肺損傷大鼠肺組織Survivin以及Caspase-3因子表達(dá)增加，其肺泡灌洗液內(nèi)IL-1β以及TNF-α致炎因子的表達(dá)增加。
　　2.在ALI早期，姜黃素可能通過減少Survivin的表達(dá)，并減少IL-1β以及TNF-α致炎因子的表達(dá)，進(jìn)而減輕炎癥反應(yīng)。
　　3.在ALI后期，姜黃素可能通過減少Caspase-3的表達(dá)而減少肺正常組織凋亡，另一方面也調(diào)控Survivin的表達(dá)，可能是通過對二