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文檔簡介
1、目的:1.以秋水仙堿為對照藥物,觀察中藥復方柔肝抑纖飲水煎劑對血吸蟲病小鼠早期肝纖維化形成的影響并比較兩組的療效差別。2.考察中藥復方柔肝抑纖飲加用二至丸后在抗小鼠早期肝纖維化形成方面與單獨使用柔肝抑纖飲有無差別,明確加用二至丸后對原方有無增效、協(xié)同作用,并探討其作用機制。 方法:1.實驗一:建立小鼠血吸蟲性肝纖維化模型,將動物隨機分組:A組(空白對照組);B組(感染未治療組);C組(吡喹酮組);D組(柔肝抑纖飲組);G組(秋水
2、仙堿組)。除A組外,B、C、D、G組均人工感染日本血吸蟲尾蚴,自感染第21天開始,D組每天灌服柔肝抑纖飲濃縮水煎液,G組每天灌服秋水仙堿,A、B、C組灌服生理鹽水,連續(xù)40天。期間,C組、D組、G組在感染后第45天時,分別予以吡喹酮一次性灌胃殺蟲處理。于感染后第61天,處死動物。檢測肝功能(ALT、ALB),血清肝纖維化指標(PCⅢ、HA),肝組織HYp,進行肝臟病理組織學觀察(HE染色、VG膠原染色、電鏡下竇周隙超微結(jié)構(gòu)、免疫組化染色
3、觀察并測定肝組織Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原的表達)。2.實驗二:建立小鼠血吸蟲性肝纖維化模型,將動物隨機分組:A組(正常對照組);C組(吡喹酮組);D組(柔肝抑纖飲組);E組(柔肝抑纖飲+二至丸組)。除A組外,C、D、E組每只小鼠均人工感染日本血吸蟲尾蚴,自感染第21天開始,D組每天灌服柔肝抑纖飲濃縮水煎液,E組每天灌服柔肝抑纖飲+二至丸濃縮水煎液,A、C組灌服生理鹽水,連續(xù)40天。期間,C組、D組、E組在感染后第45天時,分別予以吡喹酮一次性
4、灌胃殺蟲處理,于感染后第61天,處死動物。檢測肝功能(ALT、ALB),血清肝纖維化指標(PCⅢ、HA),肝組織HYp,進行肝臟病理組織學觀察(HE染色、VG膠原染色、電鏡下竇周隙超微結(jié)構(gòu)、免疫組化染色觀察并測定肝組織TGF-β1、a-SMA、Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原的表達)。 結(jié)果:1.柔肝抑纖飲組與秋水仙堿組比較,在肝脾臟器系數(shù),降低ALT,升高ALB,降低HA,肝組織膠原染色(VG),減少Ⅰ型膠原的表達等方面未見顯著性差異(P>
5、0.05);而在對血清肝纖維化指標如PCⅢ、HYp,以及Ⅲ型膠原積分光密度等的改善方面,柔肝抑纖飲優(yōu)于秋水仙堿(P<0.05)。反映出中藥復方抗血吸蟲性肝纖維化具有一定的作用優(yōu)勢。在吡喹酮殺蟲處理的基礎(chǔ)上聯(lián)合應用柔肝抑纖飲或秋水仙堿對血吸蟲病小鼠早期肝纖維化的形成都有一定的抑制和阻斷作用,柔肝抑纖飲的整體療效不低于秋水仙堿,有望取代秋水仙堿,成為抗血吸蟲性肝纖維化的良藥。2.柔肝抑纖飲+二至丸組與柔肝抑纖飲組比較,在小鼠脾臟臟器系數(shù)、降
6、低血清ALT水平,降低血清HA、PCⅢ水平,減少Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原的表達等方面,均明顯優(yōu)于吡喹酮組(P<0.05,P<0.01),但柔肝抑纖飲+二至丸組與柔肝抑纖飲組兩組間比較未見顯著性差異(P>0.05),結(jié)合病理組織學觀察結(jié)果,提示兩方對血吸蟲性肝纖維化的形成都有較好的阻斷和抑制作用。柔肝抑纖飲加用二至丸后,在小鼠肝臟臟器系數(shù),升高ALB水平,降低肝組織HYp含量,肝組織膠原染色(VG)百分比含量,以及下調(diào)TGF-β1、α-SMA的
7、表達等方面優(yōu)于柔肝抑纖飲原方,兩組相比差異顯著(P<0.05);另外,與柔肝抑纖飲組比較,柔肝抑纖飲+二至丸組肝組織Ⅰ型膠原與Ⅲ型膠原積分光密度均值也呈現(xiàn)降低趨勢,但經(jīng)統(tǒng)計處理未見顯著差異(P>0.05)。 結(jié)論:1.以中醫(yī)學臟腑辨證理論和絡(luò)病理論為指導,參閱近年來慢性肝病肝纖維化臨床和實驗研究的國內(nèi)外文獻,結(jié)合導師多年的臨床用藥經(jīng)驗,提出肝纖維化的病機特點為本虛標實,病情的持續(xù)發(fā)展與“本虛”和“標實”兩方面都有關(guān)系,標實體現(xiàn)在
8、氣滯、濕熱、痰濁、瘀血、蟲毒壅塞肝絡(luò);本虛主要反映在肝脾腎三臟的氣血陰精不足,令肝體失柔。肝纖維化的病位在肝絡(luò);濕熱疫毒或蟲毒侵襲肝絡(luò)是發(fā)病的始動因素;瘀阻肝絡(luò)為肝纖維化發(fā)生的主要病理環(huán)節(jié);絡(luò)虛不榮是病變遷延難愈的內(nèi)在原因;HSC活化增殖和TGF-β1的異常表達是肝臟ECM的合成增多,降解減少,致ECM在肝內(nèi)大量沉積的主要機制。 2.確立以養(yǎng)陰柔肝,活血通絡(luò)為主要治法的中藥復方柔肝抑纖飲,選擇血吸蟲性肝纖維化動物模型,以秋水仙堿
9、為陽性對照藥物進行干預血吸蟲性小鼠早期肝纖維化形成的研究,結(jié)果提示在吡喹酮殺蟲處理的基礎(chǔ)上聯(lián)合應用柔肝抑纖飲或秋水仙堿對血吸蟲病小鼠早期肝纖維化的形成都有一定的抑制和阻斷作用,柔肝抑纖飲的整體療效不低于秋水仙堿,有望取代秋水仙堿,成為抗血吸蟲性肝纖維化的良藥。 3.柔肝抑纖飲的作用機制與下調(diào)TGF-β1表達,抑制HSC活化、增殖,從而減少了Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原等ECM在肝內(nèi)的合成與沉積有關(guān)。 4.二至丸與柔肝抑纖飲配和應用
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