KIR3DL1基因在無(wú)關(guān)供者HLA全相合異基因造血干細(xì)胞移植中的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、【目的】
　　本項(xiàng)研究采用SSP和流式細(xì)胞術(shù)方法，研究在初治惡性血液病患者、健康供者及移植后患者表達(dá)供者來(lái)源的NK細(xì)胞表面的KIR3DL1表達(dá)水平，并同時(shí)從供受者KIR基因型、單倍型、KIR/HLA受配體模式的角度，分析了KIR3DL1的表達(dá)，為研究KIR3DL1基因在預(yù)示無(wú)關(guān)造血干細(xì)胞移植預(yù)后中的作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　【方法】
　　對(duì)116例接受無(wú)關(guān)造血干細(xì)胞移植的患者（其中AML和MDS為60例、ALL40例、C

2、ML8例、其他6例）和92例正常供者，以及初診20例白血病患者，采用序列特異性引物聚合酶鏈反應(yīng)(sequence specific primers PCR． SSP)和基因測(cè)序(Sequence-base typing, SBT)進(jìn)行KIR和HLA基因分型；采用流式細(xì)胞術(shù)和4種單抗（CD3、CD56、CD159和CD158e）檢測(cè)NK細(xì)胞表面抑制性KIR3DL1的表達(dá)；并從 KIR基因型、單倍型、KIR/HLA受配體模式的角度分析初治患

3、者與正常供者KIR3DL1的表達(dá)水平。同時(shí)結(jié)合臨床資料分析移植后免疫耐受組、aGVHD組和復(fù)發(fā)組患者表達(dá)供者異源反應(yīng)性NK細(xì)胞和KIR3DL1的表達(dá)水平。
　　【結(jié)果】
　　1.研究正常供者 KIR基因型、單倍體和 KIR/HLA受配體模式，及其 KIR3DL1的表達(dá)
　　1）92例健康供者中KIR-AA，Bx1，Bx2為常見(jiàn)基因型，頻率分別為46.8％（43/92)，18.5%(17/92)，10.2(9/92)；K

4、IR-A，B1，B2，B3，B4為常見(jiàn)單體型，頻率分別為69%(128/182)，11%(20/182)，7%(13/182)，5%(8/182)，1%(2/182)。
　　2）供者 KIR3DL1基因識(shí)別受者的HLA-BW4配體，在92例供者識(shí)別受者HLA-BW4/BW4、HLA-BW4/BW6、HLA-BW6/BW6配體的頻率分別為13.79%、67.81%、18.39%，三者之間的分布有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.0001)。

5、>　　3）單倍型 KIR-A/A、KIR-B/x、KIR-B/B的KIR3DL1的中位表達(dá)水平分別為18.77%、13.14%、0.37%，三者之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P值分別是0.039、0.0003、0.0003。在單倍型KIR-B/x中同時(shí)表達(dá)KIR3DL1/2DL2與無(wú)2DL2基因KIR3DL1的表達(dá)水平分別為16.3%和11.2%，兩者的表達(dá)水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。但 KIR3DL1的表達(dá)水平在單倍型KIR-A/A與單倍型KIR-B/x無(wú)

6、2DL2基因中相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p=0.019)。
　　4）KIR3DL1識(shí)別HLA-BW4組(包括配體為HLA-BW4/BW4和BW4/BW6）與KIR3DL1不識(shí)別 HLA-BW4組（HLA-BW6/BW6）的表達(dá)水平分別是17.61%和10.65%，兩者的表達(dá)水平有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p=0.006)。
　　2. KIR3DL1在無(wú)關(guān)供者HLA全相合造血干細(xì)胞移植后的表達(dá)及臨床意義
　　1）在基因型KIR-AA組正常供者

7、和惡性血液病初治患者的KIR3DL1的中位表達(dá)水平為20.39%和9.7%；KIR-Bx組兩者KIR3DL1的中位表達(dá)水平為15.94%和6.8%，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p=0.038，p=0.023)。
　　2）在免疫耐受組中KIR3DL1在移植后1、2、3個(gè)月的表達(dá)水平分別是27.74%、23.56%、26.61%，與正常供者的表達(dá)水平相比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p>0.05）。
　　KIR3DL1識(shí)別HLA-BW4組與HLA-BW4不

8、識(shí)別組在移植后1個(gè)月的表達(dá)水平分別是21.86%和16.54%（p=0.046)；2個(gè)月的表達(dá)水平分別是19.51%和16.54%（p=0.27)；3個(gè)月的表達(dá)水平分別是19.19%和10.86%（p=0.014)。
　　3）供者為KIR-AA基因型移植后復(fù)發(fā)組的KIR3DL1中位表達(dá)水平低于免疫耐受組，在1個(gè)月時(shí)表達(dá)水平為19.11%，與免疫耐受組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p=0.023)，而2、3個(gè)月時(shí)的表達(dá)水平雖低，分別是19.84

9、%和13.69%，與免疫耐受組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。而供者為KIR-Bx基因型復(fù)發(fā)組的KIR3DL1中位表達(dá)水平均低于免疫耐受組，但未顯示統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。同時(shí)當(dāng)免疫耐受組與復(fù)發(fā)組均為KIR3DL1識(shí)別HLA-BW4組復(fù)發(fā)組KIR3DL1的表達(dá)水平低于免疫耐受組，但無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　4)當(dāng)供者 KIR3DL1不識(shí)別 HLA-BW6/BW6配體時(shí)，在aGVHD組1-3個(gè)月KIR3DL1的表達(dá)水平高于免疫耐受組，但均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

10、　　5)供者為KIR-Bx基因型的OS高于供者為KIR-AA基因型，兩者相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p=0.034)。
　　【結(jié)論】
　　除了KIR-BB不表達(dá)KIR3DL1以外，KIR3DL1基因在KIR-AA和KIR-AB中均表達(dá)。KIR3DL1的配體在HLA-BW4/BW6雜合組比例最高，呈偏態(tài)分布。初治惡性血液病患者 NK細(xì)胞表面 KIR3DL1表達(dá)水平較正常供者明顯降低，移植后復(fù)發(fā)組KIR3DL1的表達(dá)水平低于免疫耐受組。供