肝癌細(xì)胞系中多基因啟動(dòng)子區(qū)域異常甲基化狀態(tài)及逆轉(zhuǎn)的研究.pdf

1、目的：了解5種人肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)細(xì)胞系SUN449,BEL-7402,SMMC-7721,Hep3B和HepG2中,SLIT2,DAPK,RIZ1,CHFR,EDNRB和3-OST-2等6種基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化狀況,探討去甲基化藥物5-氮雜-2-脫氧胞苷(5-Aza-CdR)對(duì)5種肝癌細(xì)胞系中SLIT2基因甲基化狀態(tài)和基因表達(dá)的影響。方法：復(fù)蘇并培養(yǎng)以上5種肝癌細(xì)胞系,應(yīng)用甲基化特異性P

2、CR(Methylation-specific PCR,MSP)技術(shù),檢測(cè)5種肝癌細(xì)胞系中 SLIT2,DAPK,RIZ1,CHFR,EDNRB和3-OST-2等6種基因啟動(dòng)子區(qū)域的甲基化狀況;用不同濃度的5-Aza-CdR處理以上5種細(xì)胞后, MSP方法檢測(cè)SLIT2基因甲基化狀態(tài)的變化,RT-PCR方法檢測(cè)處理前后SLIT2 mRNA表達(dá)水平的差異。結(jié)果：SLIT2,RIZ1,EDNRB和3-OST-2等4種基因啟動(dòng)子區(qū)域在5種肝癌

3、細(xì)胞系SUN449、BEL-7402、SMMC-7721、Hep3B和HepG2中為完全甲基化,甲基化率均為100％;DAPK基因在此5種肝癌細(xì)胞系中為完全非甲基化,未發(fā)現(xiàn)甲基化狀態(tài),甲基化率為0%;CHFR基因啟動(dòng)子區(qū)在SUN449、BEL-7402、SMMC-7721和 HepG2細(xì)胞系中發(fā)生甲基化,甲基化率為80%,在SUN449、SMMC-7721和HepG2中為不完全甲基化,在BEL-7402細(xì)胞系中為完全甲基化,在Hep3B

4、中為完全非甲基化。用濃度為1mmol/L,5mmol/L,10mmol/L,20 mmol/L的5-Aza-CdR處理后,以上5種細(xì)胞系SLIT2基因均出現(xiàn)非甲基化條帶,異常高甲基化得到部分逆轉(zhuǎn);且用5-Aza-CdR處理后,各細(xì)胞系中SLIT2 mRNA表達(dá)水平較處理前顯著增加(P＜0.05)。結(jié)論：肝癌細(xì)胞系中SLIT2,RIZ1,CHFR,EDNRB和3-OST-2等5種基因啟動(dòng)子區(qū)的高甲基化是普遍現(xiàn)象,是肝癌細(xì)胞系中的頻發(fā)事件,