孤啡肽對大鼠左心室功能的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、神經(jīng)肽是一類廣泛存在于機(jī)體組織且參與多種器官生理功能調(diào)節(jié)的肽類物質(zhì)，其對心血管功能的影響一直是研究的熱點(diǎn)，孤啡肽(nociceptin，OrphaninFQ，OFQ)即是其中之一。孤啡肽是一種結(jié)構(gòu)類似于κ阿片受體的內(nèi)源性配體—強(qiáng)啡肽A的十七肽，但它與阿片類受體的親和力很低，其特異性受體為ORL1受體，與阿片受體有很高的同源性，同屬于G蛋白耦聯(lián)受體超家族。在中樞及外周應(yīng)用孤啡肽均可引起一定程度的血壓下降和心率減慢，研究認(rèn)為除與孤啡肽參與中

2、樞和外周神經(jīng)對心血管的調(diào)節(jié)有關(guān)外，還可能與其直接作用于心血管有關(guān)。目前在急性心肌缺血及心衰的研究中發(fā)現(xiàn)心肌與血漿中孤啡肽含量增高，提示孤啡肽可能參與上述病理過程，但是目前對其作用機(jī)制尚不清楚。孤啡肽是否對心功能有直接的調(diào)節(jié)作用?以及作用的機(jī)制如何? 本文對此做了進(jìn)一步的研究。 目的：研究孤啡肽對大鼠心臟功能的影響及其可能機(jī)制，以期進(jìn)一步闡述對孤啡肽參與調(diào)節(jié)心臟生理功能的認(rèn)識。 方法：本實(shí)驗(yàn)從四個方面進(jìn)行研究。 1

3、．大鼠應(yīng)用孤啡肽(靜脈注射)的在體研究：健康大鼠分為對照組(靜脈給予等體積生理鹽水)、不同濃度孤啡肽1nM組、10nM組和50nM組，采用頸動脈插管逆行置入左心室，觀察給藥前后LVSP、LVDP、+dP/dtmax、-dP/dtmax、HR的變化。 2．孤啡肽及其受體的免疫熒光化學(xué)標(biāo)定實(shí)驗(yàn)：采用組織免疫熒光觀察觀察孤啡肽及其受體在大鼠心肌中的分布；并且采用急性分離大鼠心肌細(xì)胞使用Confocal方法觀察孤啡肽受體的分布。

4、 3．孤啡肽對心肌細(xì)胞的L型鈣通道、內(nèi)向整流鉀通道及瞬時外向鉀通道研究：采用膜片鉗技術(shù)，觀察不同濃度的孤啡肽對上述離子通道功能的影響，以探討孤啡肽對心臟作用可能的機(jī)制。 4．孤啡肽對心肌細(xì)胞PKA活性的影響：提取分別經(jīng)不同濃度OFQ處理的心肌細(xì)胞蛋白，采用PKA活性分析試劑盒測定其活化程度，以探討孤啡肽作用可能的分子機(jī)制。 結(jié)果： 1．靜脈給予孤啡肽引起大鼠LNSP、INDP、+dP/dtmax、-dP/dtma

5、x、HR有明顯的劑量依賴性抑制(P＜0.05)，預(yù)先應(yīng)用孤啡肽的拮抗劑UFP-101可以阻斷此作用。 2．免疫熒光組織化學(xué)顯示在大鼠心肌組織中有孤啡肽及其受體存在而confocal結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)心肌細(xì)胞分布有孤啡肽受體。 3．膜片鉗實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，孤啡肽對心肌細(xì)胞L型鈣電流有明顯的抑制作用，但沒有明顯的劑量依賴性，以1nM孤啡肽的作用最為明顯(抑制率為22.7％，P＜0.05)，UFP-101可以阻斷此抑制作用。而孤啡肽對

6、內(nèi)向整流鉀電流和瞬時外向鉀電流均沒有明顯影響。 4．心肌細(xì)胞PKA活性分析顯示，孤啡肽對心肌細(xì)胞的PKA沒有明顯影響。給予Forskolin處理心肌細(xì)胞可以明顯增高PKA活性，而孤啡肽并不能抑制這種PKA活性的增高，提示可能孤啡肽對心肌細(xì)胞的影響并不是通過PKA機(jī)制。 結(jié)論：孤啡肽對大鼠心臟左心室收縮與舒張功能有明顯的抑制作用，此作用可能是通過孤啡肽—孤啡肽受體作用，引起心肌細(xì)胞L型鈣電流的抑制所致。進(jìn)一步的研究顯示孤啡