鼻咽癌中Epstein-Barr病毒編碼的潛伏膜蛋白1（LMP1）對(duì)β-catenin轉(zhuǎn)錄活性及表達(dá)的影響.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文鼻咽癌中EpsteinBarr病毒編碼的潛伏膜蛋白1（LMP1）對(duì)βcatenin轉(zhuǎn)錄活性及表達(dá)的影響姓名：游淑源申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：病理學(xué)指導(dǎo)教師：韓安家20080516鼻咽癌中EpsteinBarr病毒編碼的潛伏膜蛋白1(LMPl)對(duì)Bcatenin轉(zhuǎn)錄活性及表達(dá)的影響方法：(1)、應(yīng)用RTPCR方法擴(kuò)增B95—8細(xì)胞株LMPl的cDNA片段，經(jīng)基因克隆至pHA2載體，構(gòu)建pHA2LMPl重組質(zhì)粒；采用Lip

2、ofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑，將重組質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至鼻咽癌細(xì)胞，檢測(cè)LMPl蛋白表達(dá)。(2)、應(yīng)用細(xì)胞免疫熒光、雙熒光素酶報(bào)告分析檢測(cè)LMPl對(duì)不同分化程度鼻咽癌細(xì)胞株13catenin核表達(dá)及其轉(zhuǎn)錄活性的影響；應(yīng)用Westernblot方法檢測(cè)LMPl對(duì)不同分化程度鼻咽癌細(xì)胞株13catenin及P27蛋白表達(dá)水平的影響；應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)鼻咽癌組織中LMPl與13catenin表達(dá)之間的相關(guān)關(guān)系。結(jié)果：(1)、重組質(zhì)粒陽(yáng)

3、性克隆的測(cè)序結(jié)果與OenbankB958細(xì)胞株報(bào)告序列一致；將重組質(zhì)粒DNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染鼻咽癌細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后24小時(shí)收集蛋白進(jìn)行Westernblot可檢測(cè)到目的蛋白HALMPl的表達(dá)。(2)、細(xì)胞免疫熒光顯示LMPl表達(dá)明顯提高鼻咽癌細(xì)胞株CNEl和CNE2中13catenin的核表達(dá)。另外，Bcatenin的核表達(dá)在低分化鼻咽癌細(xì)胞株CNE2高于高分化鼻咽癌細(xì)胞株CNEl。(3)雙熒光素酶報(bào)告分析結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染LMPl可明顯上調(diào)CNEl和

4、CNE2中13一catenin的轉(zhuǎn)錄活性，且呈時(shí)間依賴性。另外，13一catenin的轉(zhuǎn)錄活性在低分化鼻咽癌細(xì)胞株CNE2高于高分化鼻咽癌細(xì)胞株CNEl。(4)、Westemblot結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染LMPl對(duì)鼻咽癌細(xì)胞株13catenin的總蛋白表達(dá)水平無(wú)明顯影響；但可下調(diào)P27表達(dá)水平。(4)、免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示：鼻咽癌組織中異常表達(dá)13一catenin與LMPl的表達(dá)存在正相關(guān)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(pO05)。結(jié)論：1)首次發(fā)現(xiàn)LMPl

5、表達(dá)能明顯提高鼻咽癌細(xì)胞株13catenin的核表達(dá)及其轉(zhuǎn)錄活性，且呈時(shí)間依賴性。13catenin的核表達(dá)及其轉(zhuǎn)錄活性在低分化鼻咽癌細(xì)胞株CNE2高于高分化鼻咽癌細(xì)胞株CNEl；2)本實(shí)驗(yàn)顯示轉(zhuǎn)染LMPl對(duì)鼻咽癌細(xì)胞株Bcatenin的總蛋白表達(dá)水平無(wú)明顯影響。3)LMPl表達(dá)可下調(diào)鼻咽癌細(xì)胞株P(guān)27表達(dá)水平。4)鼻咽癌組織中LMPl表達(dá)與13catenin的異常表達(dá)存在明顯的正相關(guān)。提示EB病毒編碼的LMPl可能通過(guò)13cateni