端粒酶抑制劑作用人肝癌、鼻咽癌細胞株前后基因表達譜和蛋白表達譜變化的研究.pdf

1、目的：通過分析不同作用機制端粒酶抑制劑分別作用肝癌細胞株SMMC-7721、鼻咽癌細胞株CNE2后基因表達譜和蛋白表達譜的變化情況，挖掘不同端粒酶抑制劑影響的共性變化基因和共同差異蛋白，探討影響端粒酶活性的可能分子靶點。 方法：1、MTT試驗檢測三種不同機制端粒酶抑制劑：EGCG，針對hTR的反義核苷酸序列ASODN和針對hTR的正義核苷酸序列SODN，分別抑制肝癌細胞株SMMC-7721、鼻咽癌細胞株CNE2的最佳作用濃度。2

2、、培養(yǎng)兩種癌細胞至對數(shù)生長期，以EGCG，ASODN和SODN的最佳作用濃度作用于細胞，提取藥物作用后細胞的RNA，運用Affymetrix U133A 2.0人基因組表達譜芯片檢測基因表達譜的變化，篩選共同差異基因。3、用EGCG，ASODN，SODN，ADM，ATRA，AZT，HAODN，HSODN八種不同的端粒酶抑制劑分別作用于SMMC-772l和CNE2細胞，提取藥物作用后細胞的總蛋白，運用基層輔助激光解析時間飛行質(zhì)譜(SELI

3、D-TOF-MS)技術(shù)檢測蛋白的變化，篩選共同差異蛋白。 結(jié)果：1、MTT試驗結(jié)果：以細胞抑制率達50％左右的藥物濃度為最佳作用濃度，作用48h后，EGCG，ASODN及SODN對SMMC-772l細胞的最佳作用濃度分別為：125.0 mg/L，6.0 μ mol/L，6.0 μ mol/L；對CNE2細胞的最佳作用濃度同樣為：125.0 mg/L，6.0 μ mol/L，6.0 μ mol/L。 2、EGCG，ASOD

4、N及SODN三種端粒酶抑制劑作用兩種癌細胞后基因表達譜變化程度不一： (1)肝癌SMMC-7721細胞中，經(jīng)EGCG作用后，表達差異2倍以上的基因共196個，包括上調(diào)基因132個和下調(diào)基因64個；ASODN作用后表達差異基因2025個，包括上調(diào)基因897個，下調(diào)基因1128個；經(jīng)SODN作用后表達差異基因2337個，包括上調(diào)基因1254個，下調(diào)基因1083個。ASODN和SODN均改變了14500個基因中近14％基因的表達，EG

5、CG影響表達的基因則不足2％。 (2)鼻咽癌CNE2細胞經(jīng)EGCG作用后，表達差異2倍以上的基因3193個，包括上調(diào)基因1217個，下調(diào)基因1976個；ASODN作用后表達差異基因262個，包括上調(diào)基因158個和下調(diào)基因104個；SODN作用后表達差異基因151個，包括上調(diào)基因34個，下調(diào)基因117個。ASODN和SODN影響表達的基因均不足2％，EGCG影響表達的基因則達22％。 3、EGCG，ASODN及SODN三種

6、端粒酶抑制劑作用兩種癌細胞后的共同差異基因： (1)EGCG作用SMMC-7721細胞及CNE2細胞后均上調(diào)的10個基因：BTGI，TXNIP，SGK，LDLR，TRIBI，PER2，HISTIH2AG，HIFO，TFPI，HSPBAPI；均下調(diào)的8個基因：IDI，ID2，ID3，F(xiàn)ABP3，AKRIBl0，PTGES，HSPHI，ANGPTL4。 (2)ASODN作用SMMC-7721細胞及CNE2細胞后均上調(diào)的11個基因：T

7、IMP3，CYP51AI，NT5E，SPRY2，F(xiàn)GF2，AREG，SC4MOL，DDIT3，ETV4，RASA4，PHLDAI；均下調(diào)的9個基因：DCN，AKRIBIO，MRl，MUCl，UGTIAl0，AKRIC3，LXN，TMEM45A，UGTIA8。 (3)SODN作用SMMC-7721細胞及CNE2細胞后，均上調(diào)的2個基因：SERPINEI，KRTHA4；均下調(diào)的7個基因：KIAA0152，ANP32A，NPTXI，A

8、PISl，HMGCSI，HISTIH4C，SC4MOL。 (4)三種抑制劑作用SMMC-7721細胞后，均上調(diào)的12個基因：BTGI，WSBI，MXII，CCNG2，BCL6，WASL，SCAMPl，HIFO，RALGDS，F(xiàn)OS，TFPI，KLHL24：均下調(diào)的4個基因：D1O2，AKRIB10，ID3，AKRIC1。 (5)三種抑制劑作用CNE2細胞后，均上調(diào)僅1個基因KRTHA4，均下調(diào)僅1個基因CA5B。

9、 (6)共同表達差異基因的功能涉及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細胞周期調(diào)控、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、細胞凋亡、能量代謝等。 4、ADM，ATRA，AZT，ASODN，SODN，EGCG，HASODN和HNODN八種端粒酶抑制劑作用兩種癌細胞后蛋白表達譜的變化： (1)SMMC-7721細胞經(jīng)八種端粒酶抑制劑作用后，分別有28，20，33，12，24，18，10，23個蛋白質(zhì)低表達；分別有6，20，7，41，13，25，42，20個蛋白質(zhì)高表達。

10、 (2)CNE2細胞經(jīng)八種端粒酶抑制劑作用后，分別有14，26，27，23，31，42，26，30個蛋白低表達；分別有22，11，18，18，7，7，13，8個蛋白質(zhì)高表達。 5、ADM，ATRA，AZT，ASODN，SODN，EGCG，HASODN和HNODN八種端粒酶抑制劑作用兩種癌細胞后的共同差異蛋白： (1)于SMMC-7721細胞，八種端粒酶抑制劑作用組均呈低表達的差異蛋白6個，相對分子量分別為2477.89

11、Da，3723.96 Da，3898.37 Da，4067.51Da，4127.75 Da和4216.32 Da；均高表達的差異蛋白2個，相對分子量分別為2205.47Da和6647.26 Da。 (2)于CNE2細胞，八個端粒酶抑制劑作用后均呈低表達的差異蛋白1個，相對分子量為2657.14 Da；無共同高表達的差異蛋白。 結(jié)論： 1、在同種腫瘤細胞中，三種端粒酶抑制劑EGCG、ASODN及SODN作用后，表現(xiàn)

12、出共性變化的基因。ADM，ATRA，AZT，ASODN，SODN，EGCG，HASODN和HNODN八種端粒酶抑制劑作用后，亦表現(xiàn)出共性變化的蛋白。這些基因與蛋白可能參與了端粒酶活性的調(diào)控，并可能為調(diào)控端粒酶活性的關(guān)鍵點和不同機制端粒酶抑制劑作用的共同靶點。 2、在不同腫瘤細胞(SMMC-7721細胞和CNE2細胞)之間，沒有發(fā)現(xiàn)三種端粒酶抑制劑作用后均共性變化的基因；也無八種端粒酶抑制劑作用后均共性變化的蛋白。提示端粒酶抑制劑