褶皺假絲酵母菌雞腸道定置變異株的誘變、篩選與鑒定.pdf

1、益生菌能改善宿主微生態(tài)平衡而發(fā)揮有益作用,對提高宿主健康水平和健康狀態(tài)有重要的作用。益生菌主要來源于動物腸道正常生理性菌和非腸道菌。目前，已有多種益生菌被廣泛的應用在畜牧業(yè)上，如乳酸桿菌類，雙歧桿菌類，芽孢桿菌類，酵母菌類等，在實際生產(chǎn)應用中的益生菌制劑多為上述單一的益生菌或多種益生菌菌株的混合物。酵母是一類單細胞的真核生物，是一種常用的真核模式生物，有著重要的益生功能。因抗生素產(chǎn)生的種種問題，2006年歐盟開始全面禁止飼用抗生素，促使

2、人們尋求綠色、安全、高效飼料添加劑作為其替代品為一種微生態(tài)制劑.酵母菌及其培養(yǎng)物因具有綠色天然、無毒、無害、無殘留等特點，成為了研究熱點。
　　褶皺假絲酵母(Candida rugosa)，原稱柱狀假絲酵母(Candida cylindracea)，是一種半子囊無孢子、假絲狀、單細胞、不致病的酵母菌。Candida rugosa含有大量的脂肪酶，其對于脂肪的分解代謝有一定的促進作用，其酶制劑已經(jīng)被廣泛應用在化工制藥、油脂、食品等方

3、面。C.rugosa并非雞腸道內(nèi)的固有益生菌株，因此野生C.rugosa菌株無法在雞腸道內(nèi)長時間滯留，實驗測定實驗室保存的CRZL-14菌株在雞體內(nèi)最長滯留時間為14h，不能長久的促進脂肪的分解代謝。因此本實驗旨在通過科學方法，篩選到能在雞腸道內(nèi)較長時間滯留的C.rugosa雞腸道變異株。誘變育種是通過運用物理、化學因素誘導動植物的遺傳特性發(fā)生變異，再從變異群體中選擇符合人們某種要求的單株或個體，進而培育成新的品種或種質(zhì)的育種方法。它是

4、繼選擇育種和雜交育種之后發(fā)展起來的一項現(xiàn)代育種技術(shù)。本研究通過紫外線誘變C.Rugosa與雞體內(nèi)傳代篩選相結(jié)合的方法，篩選能夠在雞腸道內(nèi)長時間滯留的變異菌株，促進雛雞的生長發(fā)育。本研究主要進行了以下工作：
　　（一）褶皺假絲酵母菌的誘變與篩選：
　　通過改變紫外線（UV）的垂直照射距離(15、20、25cm)、照射時間（0.5、1、1.5min）來誘變菌株，挑選出41℃時在YPD平板上生長良好的5組菌株。將其灌服3周齡的海蘭

5、褐蛋雞，挑選出滯留時間長的一組CRZL-18，經(jīng)雞體內(nèi)傳代篩選，最終獲得了滯留時長為34h的一株變異菌株CRZL-26，利用形態(tài)學和基因測序進行鑒定，序列比對的重合率均大于99％，從分子水平上鑒定為褶皺假絲酵母菌。
　　（二）雛雞日齡對于褶皺假絲酵母菌在雞腸道內(nèi)滯留情況的影響：
　　通過灌服海蘭褐蛋雞CRZL-14/CRZL-18/CRZL-26發(fā)現(xiàn)，雛雞日齡影響著C.Rugosa在雞腸道內(nèi)的滯留時間，隨著雛雞日齡的增加，C