宮頸脫落細(xì)胞hTERC基因的表達(dá)及其與宮頸上皮內(nèi)瘤變的關(guān)系.pdf

1、在世界范圍內(nèi)，子宮頸癌（Cervical Cancer）是嚴(yán)重威脅婦女健康的主要惡性腫瘤之一。發(fā)病率居女性惡性腫瘤的第二位，近年來宮頸癌的發(fā)病率逐步上升且趨于年輕化，早期篩查宮頸癌前病變可阻斷宮頸癌的發(fā)生，目前宮頸癌篩查的主要手段是細(xì)胞病理學(xué)檢查和高危型人乳頭狀瘤病毒（high risk human papillomavirus，HR-HPV）檢測。細(xì)胞病理學(xué)檢查敏感性一般在55％～80％左右，但一旦發(fā)現(xiàn)異常細(xì)胞，特異性可達(dá)到90％以上

2、。HPV檢測雖敏感性高，但特異性一般在30％左右，這是由于大多數(shù)HPV陽性的病人可自然轉(zhuǎn)陰，并不一定進(jìn)展為宮頸癌。因而，從宮頸癌篩查及早期診斷角度出發(fā)，迫切需要其它可靠指標(biāo)或手段來協(xié)助以上檢查，使篩查更準(zhǔn)確、可靠及更有預(yù)測性。
　　 宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervical intraepithelial neoasia， CIN）發(fā)展到宮頸浸潤癌需要經(jīng)過一個(gè)較長的階段，并且低級別宮頸上皮內(nèi)瘤變絕大多數(shù)都可自然回退，僅極少部分進(jìn)展為癌。

3、近年來的研究表明，人類大多數(shù)腫瘤細(xì)胞，特別是實(shí)體腫瘤細(xì)胞，常表現(xiàn)為染色體不穩(wěn)定性（chromosome instability，CI），即染色體數(shù)目的改變和染色體結(jié)構(gòu)異常。宮頸細(xì)胞由非典型性發(fā)育異常向?qū)m頸癌轉(zhuǎn)變的過程中幾乎都伴有3號染色體長臂擴(kuò)增。其中，涉及到的最重要的基因可能是人類染色體端粒酶RNA亞單位（Human telomerase RNA component，hTERC）基因。該基因的擴(kuò)增可阻止細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致腫瘤產(chǎn)生。因此，h

4、TERC基因的異常擴(kuò)增可能是宮頸癌形成的早期事件。本研究利用熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization， FISH）方法，通過檢測正常宮頸及不同級別上皮內(nèi)病變患者宮頸脫落細(xì)胞內(nèi)hTERC基因的表達(dá)，探討hTERC基因在子宮頸癌發(fā)生、發(fā)展進(jìn)程中所起的作用，為子宮頸癌的篩查及早期診斷提供依據(jù)。材料和方法
　　 1.研究對象
　　 選取2008年6月至2009年1月鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院婦

5、科門診和住院患者共100例，選取2008年3月至2009年3月河南省腫瘤醫(yī)院婦科門診和住院患者共79例，收集其宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有研究對象均簽署知情同意，同時(shí)須有組織病理學(xué)結(jié)果，按照宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變診斷處理規(guī)范分為CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ級，宮頸癌診斷按照《婦產(chǎn)科學(xué)》第六版診斷標(biāo)準(zhǔn)。
　　 排除標(biāo)準(zhǔn)：除外先天性遺傳病、妊娠、生殖道急性炎癥和嚴(yán)重內(nèi)科疾病患者。
　　 患者年齡21～61歲，平均36.89±8.72歲。

6、所有患者均行陰道鏡檢查，并經(jīng)陰道鏡下取活檢，常規(guī)送病理檢查。
　　 2.實(shí)驗(yàn)方法
　　 采用液基細(xì)胞技術(shù)TCT（ThinPrep（）Cytology Test）方法采集宮頸脫落細(xì)胞，按照2001版的TBS（The Bethesda System）系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)胞病理學(xué)診斷，分為未見上皮內(nèi)病變或惡性細(xì)胞（Negative for Intraepithelial Lesion or Malignancy， NILM），無明確診斷

7、意義的非典型鱗狀上皮細(xì)胞（Atypical Squamous Cells of Undetermined Signification，ASC-US）、非典型鱗狀上皮細(xì)胞不除外高度鱗狀上皮內(nèi)病變（Atypical Squamsus cells-Cannot exclude HSIL，ASC-H）、低度鱗狀上皮內(nèi)病變（Low-grade squamous Intraepithelial Lesion，LSIL）、高度鱗狀上皮內(nèi)病變（High

8、-grade squamous Intraepithelial Lesion，HSIL）和宮頸癌標(biāo)本。利用薄層液基細(xì)胞學(xué)技術(shù)，用其剩余標(biāo)本5～10ml細(xì)胞懸液進(jìn)行FISH操作，檢測不同級別上皮內(nèi)病變及宮頸癌患者脫落細(xì)胞內(nèi)hTERC基因的表達(dá)。采用二代雜交捕獲（Hybrid Capture2，HC2）技術(shù)方法檢測高危型HPV感染情況。
　　 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS11.5進(jìn)行處理，多樣本均數(shù)比較采用t

9、檢驗(yàn)，率和構(gòu)成比之間的比較采用X2檢驗(yàn)，以α=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。兩種診斷方法的比較采用ROC曲線分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.細(xì)胞學(xué)異常組（ASCUS組、LSIL組、HSIL組、鱗狀細(xì)胞癌組）與正常細(xì)胞學(xué)對照組比較，hTERC基因陽性率差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。
　　 2.HSIL組、宮頸癌組hTERC基因陽性率分別顯著高于ASCUS組與LSIL組（P<0.001）。
　　 3.CIN

10、Ⅱ/Ⅲ組和宮頸癌組的hTERC陽性率均顯著高于正常對照組，（P<0.001）。且CINⅡ/Ⅲ組和宮頸癌組的陽性率顯著高于CINⅠ組，P值分別為0.0004和0.0001。
　　 4.ASC-US、ASC-H、LSIL、HSIL以上組中高危型HPV DNA陽性率分別為54.8％（17/31）、75.0％（3/4）、60.7％（17/28）和92.3％（12/13），HSIL以上組高危型HPVDNA陽性率明顯高于ASC-US組（P<

11、0.05），ASC-US、ASC-H、LSIL之間相比則差異無顯著性（P>0.05）。
　　 5.以組織病理學(xué)診斷為金標(biāo)準(zhǔn)，將CINⅡ及其以上診斷定為陽性，利用ROC曲線比較FISH法檢測hTERC基因和細(xì)胞學(xué)結(jié)合TBS分級預(yù)測CINⅡ/Ⅲ以上患者的敏感度和特異度。以LSIL為界點(diǎn)，細(xì)胞學(xué)檢測CINⅡ及其以上患者的敏感度為76.8％，特異度為93.7％；以陽性細(xì)胞>8％為界點(diǎn)，F(xiàn)ISH法檢測CINⅡ及其以上患者的敏感度為79.8

12、％，特異度為83.4％。細(xì)胞學(xué)和FISH法的ROC曲線下面積分別為：0.913和0.862，二者相比無顯著性差異。
　　 結(jié)論：
　　 1.隨細(xì)胞學(xué)病變程度增加，hTERC基因陽性表達(dá)率具有增加趨勢。
　　 2.端粒酶。hTERC基因的擴(kuò)增與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展具有相關(guān)作用。
　　 3.FISH技術(shù)檢測上皮內(nèi)病變和細(xì)胞學(xué)相比在總體的敏感度和特異度上無顯著性差異。但用兩種方法作為初篩CIN均有較高價(jià)值，兩者結(jié)合