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1、目的：
通過(guò)體外培養(yǎng)人晶狀體上皮細(xì)胞(HLECs)，觀察ATP競(jìng)爭(zhēng)性mTORC2抑制劑PP242對(duì)體外培養(yǎng)的HLECs增殖的抑制作用及干擾素/維甲酸誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡相關(guān)基因19(GRIM-19)表達(dá)的影響。
方法:
對(duì)永生系HLECs系SRA01/04進(jìn)行培養(yǎng)及傳代，Cell Counting Kit-8比色法檢測(cè)100，250，500，750，1000nmol/LPP242分別處理細(xì)胞株SRA01/04后12
2、h、24h、48h細(xì)胞生長(zhǎng)情況;將SRA01/04細(xì)胞株分為A、B、C、D組，B、C、D作為實(shí)驗(yàn)組分別使用100nmol/L，250nmol/L，500nmol/L PP242培養(yǎng)液處理，A組作為對(duì)照組使用同體積DMSO培養(yǎng)液處理。培養(yǎng)48h后應(yīng)用Western blot法及實(shí)時(shí)定量RT-PCR法檢測(cè)GRIM-19蛋白及其mRNA的表達(dá)情況。
結(jié)果:
100，250，500，750，1000nmol/L PP242對(duì)
3、HLECs系SRA01/04作用12，24，48 h后，其抑制率分別為:12h組:8.59％，14.53％，19.62％，23.01％，28.80％;24 h組:10.22％,19.67％,34.92％,42.90％,46.86％;48h組:24.19％,48.13％,54.54％，61.36％，65.34％，與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);100，250，500nmol/LPP242處理SRA01/0448 h后，We
4、stern blot檢測(cè)結(jié)果顯示GRIM-19蛋白的表達(dá)水平逐漸增強(qiáng);實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，GRIM-19 mRNA表達(dá)增強(qiáng)，絕對(duì)定量mRNA結(jié)果分別為:0.700±0.112，0.994±0.128，1.584±0.173，與正常對(duì)照組(0.456±0.177)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
結(jié)論:
ATP競(jìng)爭(zhēng)性mTORC2抑制劑PP242對(duì)體外培養(yǎng)的HLECs增殖存在抑制作用，其作用強(qiáng)度呈劑量
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