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文檔簡介
1、目的:
通過體外培養(yǎng)人晶狀體上皮細胞(HLECs),觀察ATP競爭性mTORC2抑制劑PP242對體外培養(yǎng)的HLECs增殖的抑制作用及干擾素/維甲酸誘導細胞凋亡相關(guān)基因19(GRIM-19)表達的影響。
方法:
對永生系HLECs系SRA01/04進行培養(yǎng)及傳代,Cell Counting Kit-8比色法檢測100,250,500,750,1000nmol/LPP242分別處理細胞株SRA01/04后12
2、h、24h、48h細胞生長情況;將SRA01/04細胞株分為A、B、C、D組,B、C、D作為實驗組分別使用100nmol/L,250nmol/L,500nmol/L PP242培養(yǎng)液處理,A組作為對照組使用同體積DMSO培養(yǎng)液處理。培養(yǎng)48h后應用Western blot法及實時定量RT-PCR法檢測GRIM-19蛋白及其mRNA的表達情況。
結(jié)果:
100,250,500,750,1000nmol/L PP242對
3、HLECs系SRA01/04作用12,24,48 h后,其抑制率分別為:12h組:8.59%,14.53%,19.62%,23.01%,28.80%;24 h組:10.22%,19.67%,34.92%,42.90%,46.86%;48h組:24.19%,48.13%,54.54%,61.36%,65.34%,與對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05);100,250,500nmol/LPP242處理SRA01/0448 h后,We
4、stern blot檢測結(jié)果顯示GRIM-19蛋白的表達水平逐漸增強;實時定量RT-PCR檢測結(jié)果顯示,GRIM-19 mRNA表達增強,絕對定量mRNA結(jié)果分別為:0.700±0.112,0.994±0.128,1.584±0.173,與正常對照組(0.456±0.177)比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
結(jié)論:
ATP競爭性mTORC2抑制劑PP242對體外培養(yǎng)的HLECs增殖存在抑制作用,其作用強度呈劑量
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