AG490對(duì)高糖誘導(dǎo)的人晶狀體上皮細(xì)胞向間質(zhì)轉(zhuǎn)分化的抑制作用.pdf

1、目的：
　　 本實(shí)驗(yàn)擬研究在高糖誘導(dǎo)人晶狀體上皮細(xì)胞向間質(zhì)轉(zhuǎn)分化的過(guò)程中,JAK-STAT通路的作用及AG490對(duì)此過(guò)程的影響。
　　 研究方法：
　　 低糖(5.5mM)DMEM培養(yǎng)液體外培養(yǎng)人晶狀體上皮細(xì)胞系SRA01/04。高糖(30.5mM)處理細(xì)胞,按照是否加入AG490及其濃度的不同分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。
　　 1、CCK-8試劑盒檢測(cè)晶狀體上皮細(xì)胞的活性,選擇適當(dāng)?shù)腁G490的作用濃度和作用時(shí)

2、間;
　　 2、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力的變化;
　　 3、RT-PCR方法半定量檢測(cè)TGF-β1、FN、α-SMA的mRNA表達(dá)量變化。
　　 結(jié)果：
　　 隨著AG490濃度(10、25、50、100μM)的增加和處理時(shí)間(6、12、24、48、72h)的延長(zhǎng),細(xì)胞活性呈下降趨勢(shì),都未達(dá)到LD50,后續(xù)實(shí)驗(yàn)選擇實(shí)驗(yàn)組AG490濃度為10和50μM,處理時(shí)間分別為6、12、24和48小時(shí)。隨著時(shí)間的

3、延長(zhǎng),各組劃痕的閉合程度和轉(zhuǎn)分化標(biāo)志物的表達(dá)量都有所不同,在不同的處理時(shí)間(6、12、24、48h),高糖組與低糖組相比,細(xì)胞的遷移能力增加(P＜0.05),TGF-β1、FN、α-SMA表達(dá)量增高(P＜0.05);AG490組與HG組相比,細(xì)胞的遷移能力降低(P＜0.05),TGF-β1、FN、α-SMA表達(dá)量下降。其中AG50組與高糖組相比,TGF-β1、FN、α-SMA的相對(duì)表達(dá)量在各時(shí)間點(diǎn)差異顯著(P＜0.05);AG10組與高

4、糖組相比,TGF-β1的相對(duì)表達(dá)量在12、24和48小時(shí)差異顯著(P＜0.05),在6小時(shí)差異不顯著(P＞0.05);FN的相對(duì)表達(dá)量在6、12、24和48小時(shí)差異顯著(P＜0.05);α-SMA的相對(duì)表達(dá)量在48小時(shí)差異顯著(P＜0.05),在6、12和24小時(shí)差異不顯著(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 JAK-STAT通路通過(guò)影響TGF-β1和細(xì)胞外基質(zhì)轉(zhuǎn)錄表達(dá)參與了高糖誘導(dǎo)的人晶狀體上皮細(xì)胞向間質(zhì)轉(zhuǎn)分化的過(guò)程