mTOR信號轉(zhuǎn)導途徑在再生障礙性貧血T淋巴細胞中的改變.pdf

1、目的：
　?。?）檢測再生障礙性貧血（AA）CD3+T淋巴細胞中的mTOR信號轉(zhuǎn)導途徑中各分子：Akt、mTOR、TSC、P70S6K、S6、4EBP1磷酸化水平、及該途徑上游負性調(diào)節(jié)因子SirtT1和下游負性調(diào)節(jié)因子GAS5的表達情況，探討mTOR信號通路在AA發(fā)病過程中的作用。
　?。?）豐富AA中T淋巴細胞活化機制，并以此指導尋找新的治療方法和藥物。
　　方法：
　?。?）流式細胞術(shù)檢測13例AA患者外周血

2、CD3+T淋巴細胞中磷酸化Akt（p-Akt）、磷酸化mTOR（p-mTOR）、磷酸化TSC（p-TSC）、磷酸化P70S6K（p-P70S6K）、磷酸化S6（p-S6）、磷酸化4EBP1（p-4EBP1）、SirtT1表達水平。同時以14例體檢者外周血為正常對照組、急性T淋巴細胞白血病細胞株（CEM）作為陽性對照組。
　　（2）實時定量PCR法測定27例AA患者GAS5的表達，與24例正常對照、急性T淋巴細胞白血病細胞株（CEM

3、）陽性對照相比較。
　?。?）比較AA組與正常對照組Sirt1/p-Akt、Sirt1/p-TSC、Sirt1/p-mTOR、Sirt1/p-4EBP1、 Sirt1/p-P70S6K及Sirt1/p-S6之間的差異，并分析AA患者外周血中性粒細胞計數(shù)（ANC）及淋巴細胞計數(shù)（Ly）與各比值之間的相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　（1）AA組CD3+T淋巴細胞中，mTOR途徑各磷酸化分子：p-Akt、p-TSC、p-mTOR、

4、p-P70S6K、p-S6、p-4EBP1的表達水平分別為：(8.77±1.61)、(45.05±25.53)、(15.97±11.20)、(17.81±11.22)、(19.79±9.05)、(140.60±86.05)；正常對照組中為：(2.83±1.04)、(16.65±10.84)、(2.95±1.23)、(3.55±1.46)、(2.96±1.01)、(26.83±16.82)；與正常對照組相比， AA組mTOR途徑中各磷酸化

5、分子表達水平顯著升高，P均<0.05。
　　（2）AA組CD3+T淋巴細胞中：mTOR途徑負性調(diào)節(jié)因子：Sirt1、GAS5的表達水平分別為：(9.08±2.10)、(9.04±4.26)；正常對照組為：(10.39±2.31)、(12.43±4.50)；與正常對照組相比，AA組中GAS5的表達水平明顯降低，P<0.05。兩組間Sirt1表達水平無明顯差異，P=0.149，但AA組中Sirt1/p-Akt、Sirt1/p-TSC、

6、Sirt1/p-mTOR、Sirt1/p-4EBP1、Sirt1/p-P70S6K及Sirt1/p-S6的值顯著低于正常對照組，P<0.05，AA患者外周血ANC與 Sirt1/p-TSC、Sirt1/p-mTOR、Sirt1/p-4EBP1、 Sirt1/p-P70S6K正相關(guān)， Ly與Sirt1/p-mTOR、Sirt1/p-4EBP1負相關(guān)，P均<0.05。
　　（3）陽性對照組CEM細胞株中，mTOR途徑各磷酸化分子：p-

7、Akt、p-TSC、p-mTOR、p-P70S6K、p-S6、p-4EBP1的表達水平分別為：(19.50±4.72)、(103.9±20.09)、(31.64±17.37)、(35.36±15.35)、(46.78±14.70)、(264.74±42.01)；與AA組相比，陽性對照組mTOR途徑中各磷酸化分子表達水平顯著升高，P<0.05。
　?。?）陽性對照組CEM細胞株中，mTOR途徑負性調(diào)節(jié)因子：Sirt1、GAS5的表達

8、水平分別為：(9.24±2.53)、(2.89±1.41)；CEM細胞株中GAS5表達水平低于AA組，P<0.05，Sirt1兩者之間無明顯異常,P=0.897。
　　結(jié)論：
　　（1）AA組CD3+T淋巴細胞mTOR途徑各磷酸化蛋白表達水平均明顯增高，提示AA組中mTOR途徑處于相對活化狀態(tài)，可能參與AA組T淋巴細胞的活化。
　?。?）AA組CD3+T淋巴細胞中mTOR途徑上游負性調(diào)節(jié)因子Sirt1的表達相對不足，下