表皮生長因子受體（EGFR）和Fms樣酪氨酸激酶（FLT3）基因在畢赤酵母中的表達(dá).pdf

1、表皮生長因子受體(EGFR)和Fms樣酪氨酸激酶(FLT3)是兩種重要的具有酪氨酸激酶活性的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的跨膜受體。EGFR信號(hào)途徑與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有著密切的關(guān)系。Fms樣酪氨酸激酶(FLT3)在多種白血病的患者中非正常表達(dá)，它們?cè)诖龠M(jìn)診斷與治療腫瘤上具有非常重要的作用。 巴斯德畢赤酵母(Pichiapastoris)表達(dá)系統(tǒng)是一種高效的外源蛋白基因表達(dá)系統(tǒng)，具有高表達(dá)、高穩(wěn)定、高分泌、容易放大和成本低等優(yōu)點(diǎn)，所以，選擇畢赤酵母表

2、達(dá)系統(tǒng)來表達(dá)EGFR和FLT3。EGFR和FLT3的基因片段分別克隆到pPICZαA中，并通過測(cè)序鑒定。構(gòu)建好的pPICZαA-EGFR和pPICZαA-FLT3分別經(jīng)過Sac Ⅰ和BstX Ⅰ進(jìn)行線性化后，電轉(zhuǎn)化X33畢赤酵母中。用抗生素zeoein篩選陽性克隆，并篩選出多拷貝的菌株。篩選高表達(dá)菌株并優(yōu)化培養(yǎng)條件，例如：誘導(dǎo)的時(shí)間，甲醇的誘導(dǎo)濃度，以及磷酸鉀緩沖液(pH6.0)的影響。pPICZα A-EGFR/X33和pPICZαA