腫瘤靶向抗體-IFNβ整合蛋白的抗腫瘤作用及其機(jī)理研究.pdf

1、靶向腫瘤相關(guān)受體，尤其是癌基因受體的第一代抗體被越來(lái)越多的應(yīng)用于腫瘤治療。盡管治療初期腫瘤得到控制，但通常會(huì)出現(xiàn)復(fù)發(fā)或抗體耐藥現(xiàn)象。目前絕大多數(shù)解決抗體耐藥的研究和策略都是阻斷腫瘤細(xì)胞內(nèi)抵制相關(guān)的信號(hào)通路。第二代的治療性抗體通過(guò)和細(xì)胞毒性化合物或毒素偶聯(lián)，靶向遞送細(xì)胞毒藥物至腫瘤細(xì)胞。其中的一些抗體，例如Herceptin-DM1，已經(jīng)具備更小的副作用及更好的抗腫瘤效應(yīng)，但其他一些抗體則療效有限。盡管應(yīng)用了這個(gè)策略，仍會(huì)出現(xiàn)抗體耐藥，H

2、erceptin-DM1也不例外。
　　 因此，我們急需新一代的基于抗體的腫瘤治療策略出現(xiàn)。在最近的研究中，我們發(fā)展了第三代的治療性抗體，即將抗體與免疫調(diào)節(jié)因子偶聯(lián)來(lái)調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境、把腫瘤微環(huán)境從抑制/失能變成激活/活化，從而重新激活抗腫瘤天然免疫和獲得性免疫。我們已經(jīng)觀察到靶向癌基因信號(hào)可以誘導(dǎo)Ⅰ型干擾素產(chǎn)生來(lái)抑制腫瘤生長(zhǎng)。用新一代基于抗體的融合蛋白（抗體-IFNβ）靶向腫瘤組織可以同時(shí)重新激活天然免疫和獲得性免疫細(xì)胞，極大地

3、提高了抗體的治療效果，甚至在抗體抵制的腫瘤中仍然有效。
　　 之前解決抗體耐藥的策略都是阻斷眾多腫瘤內(nèi)部耐藥機(jī)制中的某一個(gè)機(jī)制，與它們不同的是，我們從一個(gè)全新的角度出發(fā)，即同時(shí)提高天然免疫和獲得性免疫應(yīng)答從而廣泛的克服抗體耐藥而不依賴于腫瘤發(fā)生耐藥的機(jī)制。我們的結(jié)果顯示抗體-IFNβ融合蛋白靶向宿主DCs而不是T細(xì)胞的IFNAR以增強(qiáng)交聯(lián)呈遞和抗腫瘤CTL應(yīng)答，這與目前廣泛使用的利用T細(xì)胞上抑制信號(hào)的免疫治療不同，而是提供了一個(gè)

4、全新的重要的免疫治療的靶點(diǎn)。同時(shí)我們的數(shù)據(jù)也顯示用第三代的抗體重新激活免疫細(xì)胞是一個(gè)比第二代抗體-毒素偶聯(lián)更好的策略，能更好的控制腫瘤:降低治療周期、對(duì)正常組織有更小的毒性、阻止多靶點(diǎn)突變腫瘤抗原引起的復(fù)發(fā)和抵制現(xiàn)象發(fā)生。
　　 此外，本研究也發(fā)現(xiàn)了宿主另一個(gè)重要的保護(hù)機(jī)制，稱為治療介導(dǎo)的獲得性抵制。我們發(fā)現(xiàn)抗體-IFNβ治療誘導(dǎo)PDL-1的表達(dá)是獲得性抵制的關(guān)鍵分子。阻斷PDL-1可使抗體-IFNβ的治療效應(yīng)最大化，解決治療介

5、導(dǎo)的抵制，完全消除抗體耐藥腫瘤。這清楚的說(shuō)明了免疫活化分子靶向特異性誘導(dǎo)的抑制通路應(yīng)該是提高腫瘤免疫治療的一個(gè)重要方向。
　　 抗體-免疫調(diào)節(jié)劑融合蛋白較之前抗體的優(yōu)勢(shì)在于其開(kāi)創(chuàng)了一條在各種各樣的腫瘤靶向抗體（分子導(dǎo)彈）上連接智能炸彈的新方法。這種融合蛋白不是新的方法，但大多數(shù)融合蛋白都是使用直接殺傷腫瘤細(xì)胞的炸彈，同時(shí)也殺傷了周?chē)拿庖呒?xì)胞。我們?cè)O(shè)計(jì)的新導(dǎo)彈遞送的是免疫調(diào)節(jié)劑，避免了非特異的破壞，動(dòng)員了宿主的免疫應(yīng)答，減輕了相

6、關(guān)的損害。既然每個(gè)腫瘤組織有不同的微環(huán)境，篩選出適當(dāng)?shù)哪[瘤組織，并正確選擇靶向腫瘤細(xì)胞的受體和免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)分子，最終應(yīng)該可以使腫瘤完全消除。因此，本研究建立了一個(gè)新的個(gè)體化的策略來(lái)調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境，提高抗腫瘤的天然免疫和獲得性免疫應(yīng)答。
　　 具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容如下:
　　 第一部分:抗體介導(dǎo)的腫瘤消退依賴于Ⅰ型干擾素
　　 1.抗體治療敏感、部分抵制、完全抵制腫瘤模型的建立。
　　 2.抗體治療腫瘤可誘導(dǎo)Ⅰ型

7、干擾素的產(chǎn)生。
　　 3.阻斷Ⅰ型干擾素信號(hào)對(duì)抗體治療效應(yīng)的影響。
　　 4.直接給予Ⅰ型干擾素足以控制腫瘤生長(zhǎng)。
　　 結(jié)論:Ⅰ型干擾素可以改善腫瘤免疫逃逸現(xiàn)象，成為潛在的免疫治療靶點(diǎn)。
　　 第二部分:靶向遞送IFNβ以增強(qiáng)抗EGFR抗體的治療效應(yīng)
　　 1.Anti-EGFR-IFNβ融合蛋白的構(gòu)建、表達(dá)及純化。
　　 2.Anti-EGFR-IFNβ融合蛋白體外功能的檢測(cè)。

8、　　 3.Anti-EGFR-IFNβ融合蛋白體內(nèi)靶向性檢測(cè)。
　　 4.Anti-EGFR-IFNβ融合蛋白體內(nèi)抑制腫瘤生長(zhǎng)能力的檢測(cè)。
　　 結(jié)論:Ab-IFNβ融合在低劑量短周期的條件下比第一代的抗體能更好的控制腫瘤生長(zhǎng)，甚至在抗體抵制腫瘤和腫瘤抗原耐受宿主身上依然有效。
　　 第三部分:Anti-EGFR-IFNβ融合蛋白發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)的機(jī)制
　　 1.Anti-EGFR-IFNβ融合蛋白的治療

9、效應(yīng)依賴于獲得性免疫。
　　 2.Anti-EGFR-IFNβ融合蛋白通過(guò)宿主造血細(xì)胞上的IFNAR發(fā)揮治療效應(yīng)。
　　 3.Anti-EGFR-IFNβ融合蛋白的抗腫瘤效應(yīng)依賴于DCs的活化。
　　 4.Anti-EGFR-IFNβ融合蛋白直接作用于DCs以改變腫瘤微環(huán)境獲得更好的抗腫瘤效應(yīng)。
　　 結(jié)論:Anti-EGFR-IFNβ治療可以增加T細(xì)胞活化以增強(qiáng)其抗腫瘤效應(yīng);其通過(guò)活化宿主造血細(xì)胞以改變

10、腫瘤微環(huán)境，而不是直接抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng);其治療效應(yīng)主要依靠提高的DC交聯(lián)呈遞使得CD8+CTL活化增強(qiáng);其依靠直接活化DC上的IFNAR發(fā)揮治療效應(yīng)，活化T細(xì)胞上的IFNAR則進(jìn)一步擴(kuò)大了該效應(yīng)。
　　 第四部分:拮抗anti-EGFR-IFNβ誘導(dǎo)的PDL-1的表達(dá)可以使腫瘤完全消退。
　　 1.Anti-EGFR-IFNβ誘導(dǎo)PDL-1表達(dá)上調(diào)。
　　 2.Anti-EGFR-IFNβ和anti-PDL-1聯(lián)

11、合治療可進(jìn)一步增強(qiáng)抗腫瘤效應(yīng)。
　　 3.Anti-EGFR-IFNβ和anti-CTLA4、anti-BTLA聯(lián)合治療無(wú)協(xié)同效應(yīng)。
　　 4.Anti-EGFR-IFNβ和anti-PDL-1聯(lián)合治療增強(qiáng)了腫瘤特異性T細(xì)胞應(yīng)答。
　　 結(jié)論:Anti-EGFR-IFNβ可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞表達(dá)抑制分子PDL-1，拮抗PDL-1的表達(dá)可使anti-EGFR-IFNβ的抗腫瘤效應(yīng)最大化，甚至抗體耐藥的腫瘤也可以完全消失。