同種異體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療重癥急性胰腺炎腎損害效果評(píng)價(jià)及對(duì)毛細(xì)血管滲漏干預(yù)機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:本研究旨在通過(guò)經(jīng)鑒定的同種異體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植到重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)腎損害的動(dòng)物模型體內(nèi),觀察MSCs對(duì)SAP合并腎損害的治療效果,并探討其對(duì)毛細(xì)血管滲漏的干預(yù)機(jī)制,為MSCs用于治療SAP合并腎損害提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1、建立SAP腎損害的大鼠模型,檢測(cè)腹水量、腹水淀粉酶(amylase,

2、AMY),血清AMY、肌酐(creatinine,Cr)、尿素氮(urea nitrogen,BUN)以及腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平變化,觀察胰腺、腎臟病理形態(tài)及毛細(xì)血管內(nèi)皮超微結(jié)構(gòu)變化;
　　2、體外培養(yǎng)MSCs,通過(guò)細(xì)胞形態(tài)檢測(cè)、生長(zhǎng)曲線觀察,細(xì)胞表面抗原流式鑒定以及體外定向誘導(dǎo)分化法結(jié)合檢測(cè)來(lái)所培養(yǎng)的細(xì)胞;

3、>　　3、通過(guò)MSCs移植到SAP動(dòng)物體內(nèi),檢測(cè)血清AMY、Cr、BUN以及TNF-α、IL-1β水平,觀察胰腺、腎臟病理形態(tài)及毛細(xì)血管內(nèi)皮超微結(jié)構(gòu)變化,并檢測(cè)胰腺、腎臟組織中水通道蛋白1(aquaporin1,AQP1)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、血管擴(kuò)張刺激磷蛋白(vasodilator stimulated phosphoprotein,VASP)mRNA及蛋白水平改變

4、。
　　結(jié)果:
　　1、膽胰管逆行注射牛磺膽酸鈉配合膽胰管結(jié)扎法能成功建立SAP合并腎損害的動(dòng)物模型;SAP合并腎損害發(fā)生時(shí),腹水量增加,腹水AMY、血清AMY、Cr、BUN、TNF-α、IL-1β明顯升高,胰腺以及腎臟組織出現(xiàn)毛細(xì)血管內(nèi)皮屏障的破壞,并隨時(shí)間增加而破壞加重;
　　2、全骨髓貼壁法和密度梯度離心法聯(lián)合培養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)典型,高度表達(dá)CD29、CD90,低表達(dá)CD34、45,且能被誘導(dǎo)分化為成骨、成脂細(xì)胞,符

5、合MSCs特性;CM-Dil對(duì)其染色,染色熒光強(qiáng),且細(xì)胞活性未見(jiàn)明顯下降;
　　3、MSCs可抑制血清TNF-α、IL-1β的過(guò)度表達(dá),抑制SAP大鼠胰腺、腎臟中AQP1、VASPmRNA及蛋白的下降,抑制SAP大鼠胰腺、腎臟中MMP-9mRNA及蛋白的升高,減輕SAP大鼠胰腺、腎臟毛細(xì)血管內(nèi)皮屏障的破壞。
　　結(jié)論:在SAP腎損害發(fā)生時(shí),移植的MSCs能夠歸巢到胰腺、腎臟受損區(qū)域,抑制炎癥因子過(guò)度表達(dá),調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)