肺炎克雷伯桿菌感染小鼠白細(xì)胞IL-10及其mRNA的變化.pdf

1、前言：
　　 肺炎克雷伯桿菌屬于腸道革蘭陰性桿菌,是引起肺炎、泌尿系感染、腹腔感染等的重要病原體。肝膿腫是消化系統(tǒng)常見感染性疾病,可引起菌血癥,嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致病人死亡。目前研究發(fā)現(xiàn),導(dǎo)致糖尿病病人發(fā)生肝膿腫的最主要病原體為肺炎克雷伯桿菌。其發(fā)病機(jī)制尚未清楚,考慮是宿主和微生物之間的相互作用所引起的免疫反應(yīng)。肺炎克雷伯桿菌具有莢膜,根據(jù)莢膜多糖結(jié)構(gòu)及抗原性的不同,可將肺炎克雷伯桿菌分為80多個(gè)莢膜血清型。研究證明其莢膜含有脂多糖,脂多

2、糖不直接引起組織細(xì)胞損傷,而是通過刺激機(jī)體產(chǎn)生多種內(nèi)源性細(xì)胞因子發(fā)揮作用。在炎癥早期起作用的主要包括TNF-α、IL-1β、IL-6等,它們相互誘生,相互調(diào)節(jié),形成復(fù)雜的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò),損傷內(nèi)皮細(xì)胞,促進(jìn)白細(xì)胞滲出,引起血管擴(kuò)張和組織壞死。近年來研究證明有多種炎性介質(zhì)在肝膿腫的發(fā)病中發(fā)揮重要作用,其中包括IL-1β、IL-6、IL-12、TNF-α等。IL-18作為IL-12的輔助因子,也用來評(píng)價(jià)肝損傷。與IL-12和IL-18等炎癥因子

3、作用相反,IL-10(interleukin-10,IL-10)扮演了一個(gè)起保護(hù)作用的角色。IL-10是一種分布廣泛,具有多種生物學(xué)活性的細(xì)胞因子。主要由人CD4+的T淋巴細(xì)胞(Th0、Th1、Th2細(xì)胞)分泌,也可以由調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞1(Tr1)以及CD8+的T淋巴細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞產(chǎn)生,其它如激活的B淋巴細(xì)胞、肥大細(xì)胞、肺泡巨噬細(xì)胞等也可分泌。研究證實(shí)IL-10主要的生物學(xué)功能是抑制和終止炎癥反應(yīng),幾乎抑制所有促炎性細(xì)胞因子的合成

4、與釋放。并促進(jìn)抑炎性細(xì)胞因子IL-1受體拮抗劑的合成,因而具有抗炎作用。任何細(xì)胞因子若想發(fā)揮其作用必須與相應(yīng)的受體相結(jié)合。所以IL-10只有與其受體(IL-10R)結(jié)合才能發(fā)揮其免疫活性。IL-10R主要存在于各種白細(xì)胞表面,如單核細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞的表面。在近來的對(duì)口腔巨細(xì)胞損傷的研究中,發(fā)現(xiàn)損傷使作為重要的抗炎因子IL-10過度表達(dá),相應(yīng)地IL-10R也表達(dá)增加。IL-10主要功能是限制和最終清除炎癥反應(yīng)。了解擴(kuò)大和縮小炎

5、癥反應(yīng)的特定方面對(duì)于發(fā)展、增強(qiáng)或抑制此過程的干預(yù)策略將是必需的。
　　 目的：
　　 探討肺炎克雷伯桿菌感染小鼠外周血白細(xì)胞IL-10及其受體變化,為解釋其發(fā)病機(jī)制和對(duì)臨床的治療給予新的途徑。
　　 方法：
　　 1.將C57BL/6J雄性小鼠30只,體重25-30g,隨機(jī)分為6組,每組5只,小鼠腹腔注射濃度分別為102cfu/ml、103cfu/ml、104cfu/ml、105cfu/ml、106cfu

6、/ml、107cfu/ml的細(xì)菌懸液(0.2ml/只),觀察小鼠的死亡時(shí)間,以確定細(xì)菌懸液的最小致死量。
　　 2.用流式細(xì)胞儀分別測定T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞上IL-10受體的表達(dá)水平。
　　 3.采用ELISA方法測定血漿中IL-10的水平。
　　 4.提取白細(xì)胞中的RNA樣本,設(shè)計(jì)合成引物后進(jìn)行RT-PCR,測定樣本中mRNA的含量。
　　 5.利用HE染色進(jìn)行病理切片觀察。
　　

7、6.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
　　 所有數(shù)據(jù)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)分析軟件處理,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,各組前后比較采用配對(duì)t檢驗(yàn),組間比較采用單因素方差分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.1C57BL/6J雄性小鼠感染后形成肝膿腫的細(xì)菌懸液最小致死劑量為103cfu/ml。
　　 2.IL-10R在外周血CD419+單核細(xì)胞表達(dá)最高,其次為CD14+B淋巴細(xì)胞,CD3+T淋巴細(xì)胞表達(dá)最少。
　　 3.感染組血