模擬微重力對肺炎克雷伯桿菌生物學(xué)特性影響的研究.pdf

1、目的：國內(nèi)外的大量研究結(jié)果已證實，微重力環(huán)境可引起許多微生物一系列的生物學(xué)特性發(fā)生改變，包括細(xì)菌的生長繁殖以及代謝等。本實驗初步研究肺炎克雷伯桿菌(Klebsiella pneumoniae，KPN)生長增殖、抗生素敏感性、表面形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)、蛋白質(zhì)表達和毒力基因表達在模擬微重力環(huán)境下的改變。
　　方法：肺炎克雷伯桿菌ATCC13883在RCCS建立的模擬微重力模型中培養(yǎng)，實驗組培養(yǎng)在軸心與地面平行的旋轉(zhuǎn)瓶中，對照組培養(yǎng)在軸心與地

2、面垂直的旋轉(zhuǎn)瓶中；使用分光光度計檢測菌株生長繁殖變化，應(yīng)用K-B紙片法和微量肉湯稀釋法檢測KPN培養(yǎng)至1d、3d、5d、7d、14d時抗生素的敏感性，在模擬微重力模型中連續(xù)培養(yǎng)14d后，使用掃描電鏡觀察KPN的表面形態(tài)，透射電鏡觀察其超微結(jié)構(gòu)，應(yīng)用表面增強激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜技術(shù)(SELDI-TOF-MS）檢測菌體的蛋白質(zhì)表達變化，利用Real-time PCR檢測4種毒力基因(wabG、ureA、fimH、uge)的表達改變。

3、r>　　結(jié)果：模擬微重力環(huán)境下肺炎克雷伯桿菌的生長繁殖加快，最終的細(xì)菌總量增加，在培養(yǎng)至第14d時抗生素阿米卡星、哌拉西林、環(huán)丙沙星的抑菌環(huán)直徑較對照組減??；由掃描電鏡觀察結(jié)果可知，KPN形態(tài)發(fā)生改變，細(xì)長的菌體增多，透射電鏡結(jié)果表明超微結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，菌體胞質(zhì)內(nèi)顆粒狀物質(zhì)增多；和對照組相比較，蛋白質(zhì)譜檢測結(jié)果分析有18個蛋白質(zhì)表達發(fā)生了變化（P<0.05）,其中蛋白表達發(fā)生上調(diào)和下調(diào)的均為9個，由Real-time PCR結(jié)果表明，毒力