模擬微重力對(duì)肺炎克雷伯桿菌生物學(xué)特性影響的研究.pdf

1、目的：國內(nèi)外的大量研究結(jié)果已證實(shí)，微重力環(huán)境可引起許多微生物一系列的生物學(xué)特性發(fā)生改變，包括細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖以及代謝等。本實(shí)驗(yàn)初步研究肺炎克雷伯桿菌(Klebsiella pneumoniae，KPN)生長(zhǎng)增殖、抗生素敏感性、表面形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)、蛋白質(zhì)表達(dá)和毒力基因表達(dá)在模擬微重力環(huán)境下的改變。
　　方法：肺炎克雷伯桿菌ATCC13883在RCCS建立的模擬微重力模型中培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)在軸心與地面平行的旋轉(zhuǎn)瓶中，對(duì)照組培養(yǎng)在軸心與地

2、面垂直的旋轉(zhuǎn)瓶中；使用分光光度計(jì)檢測(cè)菌株生長(zhǎng)繁殖變化，應(yīng)用K-B紙片法和微量肉湯稀釋法檢測(cè)KPN培養(yǎng)至1d、3d、5d、7d、14d時(shí)抗生素的敏感性，在模擬微重力模型中連續(xù)培養(yǎng)14d后，使用掃描電鏡觀察KPN的表面形態(tài)，透射電鏡觀察其超微結(jié)構(gòu)，應(yīng)用表面增強(qiáng)激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)(SELDI-TOF-MS）檢測(cè)菌體的蛋白質(zhì)表達(dá)變化，利用Real-time PCR檢測(cè)4種毒力基因(wabG、ureA、fimH、uge)的表達(dá)改變。

3、r>　　結(jié)果：模擬微重力環(huán)境下肺炎克雷伯桿菌的生長(zhǎng)繁殖加快，最終的細(xì)菌總量增加，在培養(yǎng)至第14d時(shí)抗生素阿米卡星、哌拉西林、環(huán)丙沙星的抑菌環(huán)直徑較對(duì)照組減?。挥蓲呙桦婄R觀察結(jié)果可知，KPN形態(tài)發(fā)生改變，細(xì)長(zhǎng)的菌體增多，透射電鏡結(jié)果表明超微結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，菌體胞質(zhì)內(nèi)顆粒狀物質(zhì)增多；和對(duì)照組相比較，蛋白質(zhì)譜檢測(cè)結(jié)果分析有18個(gè)蛋白質(zhì)表達(dá)發(fā)生了變化（P<0.05）,其中蛋白表達(dá)發(fā)生上調(diào)和下調(diào)的均為9個(gè)，由Real-time PCR結(jié)果表明，毒力