艱難梭菌毒素檢測(cè)及毒素B受體結(jié)合區(qū)的表達(dá).pdf

1、目的:(1)通過(guò)對(duì)湘雅醫(yī)院住院病人腹瀉患者糞便標(biāo)本中的艱難梭菌進(jìn)行篩查和不同時(shí)期檢出率的比較，了解該院腹瀉患者艱難梭菌的感染情況。(2)構(gòu)建艱難梭菌毒素B受體結(jié)合區(qū)原核表達(dá)載體，誘導(dǎo)目的蛋白表達(dá)。
　　 方法:(1)收集2009年2月-12月和2011年4月-7月湘雅醫(yī)院住院患者腹瀉病人糞便標(biāo)本106份，進(jìn)行厭氧培養(yǎng)和API鑒定，對(duì)培養(yǎng)鑒定獲得的菌株應(yīng)用PCR擴(kuò)增方法進(jìn)行A、B毒素及二元毒素基因檢測(cè)，應(yīng)用酶聯(lián)熒光免疫法進(jìn)行毒素A

2、/B檢測(cè)。(2)提取艱難梭菌基因組DNA，PCR擴(kuò)增艱難梭菌毒素B受體結(jié)合區(qū)(CDB3)基因片段，構(gòu)建原核表達(dá)載體pGEX4T-CDB3，IPTG誘導(dǎo)目的蛋白表達(dá)，采用SDS-PAGE及Western blot驗(yàn)證蛋白表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:(1)106份標(biāo)本中，厭氧培養(yǎng)陽(yáng)性率為15.09％(16/106);培養(yǎng)陽(yáng)性的菌株P(guān)CR擴(kuò)增A、B毒素基因均為陽(yáng)性，而二元毒素基因均為陰性;直接毒素A/B檢測(cè)陽(yáng)性率為12.26％(13/10

3、6)。2009年和2011年兩個(gè)時(shí)期標(biāo)本艱難梭菌檢出情況的比較，厭氧培養(yǎng)陽(yáng)性率分別為22.81％(13/57)、6.12％(3/49)，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;PCR毒素檢測(cè)陽(yáng)性率分別為22.81％(13/57)、6.12％(3/49)，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;毒素A/B檢出率分別為17.54％(10/57)、6.12％(3/49)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。分析陽(yáng)性患者臨床資料發(fā)現(xiàn)，他們住院期間用過(guò)頭孢類(lèi)、喹諾酮類(lèi)、碳青霉烯類(lèi)、廣譜青霉素、克林霉