艱難梭菌毒素檢測及毒素B受體結合區(qū)的表達.pdf

1、目的:(1)通過對湘雅醫(yī)院住院病人腹瀉患者糞便標本中的艱難梭菌進行篩查和不同時期檢出率的比較，了解該院腹瀉患者艱難梭菌的感染情況。(2)構建艱難梭菌毒素B受體結合區(qū)原核表達載體，誘導目的蛋白表達。
　　 方法:(1)收集2009年2月-12月和2011年4月-7月湘雅醫(yī)院住院患者腹瀉病人糞便標本106份，進行厭氧培養(yǎng)和API鑒定，對培養(yǎng)鑒定獲得的菌株應用PCR擴增方法進行A、B毒素及二元毒素基因檢測，應用酶聯(lián)熒光免疫法進行毒素A

2、/B檢測。(2)提取艱難梭菌基因組DNA，PCR擴增艱難梭菌毒素B受體結合區(qū)(CDB3)基因片段，構建原核表達載體pGEX4T-CDB3，IPTG誘導目的蛋白表達，采用SDS-PAGE及Western blot驗證蛋白表達情況。
　　 結果:(1)106份標本中，厭氧培養(yǎng)陽性率為15.09％(16/106);培養(yǎng)陽性的菌株PCR擴增A、B毒素基因均為陽性，而二元毒素基因均為陰性;直接毒素A/B檢測陽性率為12.26％(13/10

3、6)。2009年和2011年兩個時期標本艱難梭菌檢出情況的比較，厭氧培養(yǎng)陽性率分別為22.81％(13/57)、6.12％(3/49)，兩者差異有統(tǒng)計學意義;PCR毒素檢測陽性率分別為22.81％(13/57)、6.12％(3/49)，兩者差異有統(tǒng)計學意義;毒素A/B檢出率分別為17.54％(10/57)、6.12％(3/49)，差異無統(tǒng)計學意義。分析陽性患者臨床資料發(fā)現(xiàn)，他們住院期間用過頭孢類、喹諾酮類、碳青霉烯類、廣譜青霉素、克林霉